lactalbumin의 분리와 동정

소개글

α-lactalbumin의 분리와 동정에 관한 실험 이론 및 실험 방법입니다
단백질 농도 계산 방법
UV, Affinity chromatography, Bradford method 등에 관한 정보를 담고 있습니다.

목차

1. α-lactalbumin의 분리

2. 단백질 농도 계산 방법

3. 실험 재료
유장(milk whey)의 제조
크로마토그라피
Bradford assay

4. 실험방법
Milk whey의 준비
Gel filtration (Sephadex G50) chromatography
친화 크로마토그라피 (Affinity chromatography)
UV spectra of α-lactalbumin
Bradford method

본문내용

우유 단백질, α-lactalbumin의 분리와 동정

α-lactalbumin은 우유에 존재하는 주요 단백질 중 하나로 분자량은 14.2 KDa이고 129 개 아미노산으로 되어있으며 lactose합성 조절에 관여하는 것으로 알려졌다. α-lactalbumin은 산이나 가열에 의한 침전과 원심분리, gel filtration chromatography와 affinity chromatography에 의해 우유로부터 쉽게 분리된다. 분리된 α-lactalbumin의 순도와 양은 UV spectroscopy, Bradford method와 polyacrylamide gel electrophoresis에 의해 확인할 수 있다. 이번 실험을 통해 일련의 단백질 분리과정들을 익히게 된다.

< 중 략 >

친화 크로마토그라피 (Affinity chromatography)
상업적으로 판매되는 친화 수지(affinity resin)인 iminoacetic acid-agarose (IDA-agarose)가 충전된 칼럼을 사용하거나, 5 ml plastic syringe column에 IDA-agarose 현탁액 약 2㎖을 붓고 젤 양의 5배정도의 buffer A (10 ml)로 컬럼을 씻는다. 이 때 컬럼이 마르지 않도록 주의하여야 한다. buffer A가 젤 표면 약간 위에 있을 때, 0.5 ㎖의 0.1 M CuSO4 용액을 가하고 젤 안으로 스며들자마자 바로 젤 양의 약 15 배의 buffer A 용액 (30 ml)을 더해 과잉의 Cu(II)가 칼럼 밖으로 빠져 나오도록 한다. 이 때 친화 수지의 색이 흰색에서 엷은 청색으로 변화된다. buffer A가 gel 표면으로 바로 스며들었을 때 whey 1 ㎖을 칼럼에 첨가하고, whey가 젤로 스며들면 buffer A로 칼럼을 채우고 계속해서 1 ㎖씩 분획한다. buffer A를 바탕용액으로 하여 각 분획의 흡광도를 280 nm에서 측정한다. y축에는 A280를 x축에는 실험관 번호를 나타내는 그래프를 도식한다. A280이 거의 0이 될 때까지 (약 Buffer A 20-25mL 정도 필요함) 계속해서 분획한다.

참고 자료

없음