기기분석 - native PAGE

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native PAGE 입니다

목차

Native - PAGE
Disc gel 전기영동의 원리 및 실험 방법
Data & Result
DISCUSSION

본문내용

Native - PAGE
Native-PAGE방법은 단백질 덩어리가 가지고 있는 고유의 charge를 이용한 방법이다. SDS-PAGE는 열과 SDS를 이용해 단백질은 denature 시키지만 Native-PAGE 방법은 단백질이 접혀있는 상태 그대로 실험에 이용한다. 일반적으로 Native-PAGE는 SDS-PAGE보다 속도가 느린데 이는 SDS가 결합한 protein이 더 큰 charge를 띄기 때문이다.
단백질은 pH에 따라 다른 charge를 띄게 된다. 단백질과 같은 분자의 표면 전하에 미치는 pH의 영향은 이온화가 가능한 기(group)들의 수와 유형에 따라 좌우된다. arginine이나 lysine은 positive 를 glutamic acid 나 aspartic acid는 negative를 띄므로 이런 amino acid의 함량에 따라 단백질이 고유 pH(등전점 pI)에서 순 영전하(net zero positive charge)로 된다. 등전점보다 높은 pH에서는 단백질은 순 음전하를 가지게 되며 pH를 높임에 따라 이동도도 증가할 것이다. 그러나 이 경우 방향은 반대가 된다. 이렇듯 단백질마다 가지는 pH에 따라 다른 charge를 가진다는 성질을 이용하여 단백질간의 결합 여부 및 DNA binding protein인지 여부를 알아보는 실험도 가능하다.
gel에서의 단백질의 이동 속도는 다음과 같은 공식을 따른다.

Disc gel 전기영동의 원리 및 실험 방법
두 가지의 다른 gel이 붙어있는 상태인 Disc(discontinuous pH 또는 disc) gel 전기영동으로 시행하게 된다. 이를 사용하면 단백질 시료가 gel에 apply되었을 때 모든 시료가 같은 점에서 출발할 수 있도록 압축이 되고, 그다음에 성질에 따라 분리되게 된다. 따라서 두 gel의 농도나 pH가 다르게 설정되어 있다. 윗부분의 gel은 stacking gel이라 부르며, acrylamide 농도는 주로 3~5%이고 pH는 running gel보다 2 정도 낮은 6.5를 주로 쓰게된다. 아래의 gel은 running gel, resolving gel, separating gel 등으로 불리며, acrylamide 농도는 분리하고자 하는 단백질의 크기에 따라 6~15%를 주로 사용한다.
위의 원리를 이용한 실험 과정은 다음과 같다.

참고 자료

없음