DNA gel electrophoresis, Plasmid DNA isolation 실험

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최초 등록일: 2008.12.29
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DNA gel electrophoresis, Plasmid DNA isolation 실험레포트입니다.
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본문내용

#Purpose : 전기영동을 통해 DNA 확인

#Material : colony를 배양시킨 LB broth,
tube, centrifuge, pipette, SolⅠ, SolⅡ, SolⅢ, 100% EtOH, 70% EtOH,
vacuum dryer, D.W, 1% agarose gel, PARA Film, loading buffer

#Method :
<1> Plasmid DNA isolation
1. 1.5ml tube에 colony를 배양시킨 LB broth를 따른다.
2. centrifuge에 1분 동안 12000rpm으로 돌려 상충액과 pellet을 분리시킨다.
3. 상충액을 pipette를 이용하여 깨끗하게 버린다.
4. SolⅠ, 100마이크로 리터를 넣어준 후 2분 동안 vortex로 혼합한다.
5. SolⅡ, 200마이크로 리터를 넣어준 후 살살 8~10번 정도 inverting 해준다. 이때 뚜껑을 열어 끈적거리는 물질이 생겼는지 확인한다.
6. SolⅢ, 170마이크로 리터를 넣으면 고체처럼 뭉클해지는데 이때 inverting해준다.
7. centrifuge에 15분 동안 12000rpm으로 돌려 분리시킨다.
8. 상충액을 모두 따서 새로운 tube에 옮기고 pellet은 버린다.
9. 100% EtOH를 1ml 넣는다.
10. centrifuge에 20분 동안 12000rpm으로 돌려 분리시킨다.
11. pellet을 제외한 모든 상충액을 버린다.
12. 70% EtOH 0.5ml을 넣는다.
13. vacuum dryer에서 7분 동안 알코올을 증발시킨다.
14. D. W 30마이크로 리터 넣어 Taping하여 pellet을 녹여준다.

참고 자료

-유전자 클로닝 입문 T.A Brown 월드사이언스
-pathology.ansan.ac.kr/Board/bbsUpFiles/분자11교시.ppt
-http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=TmJd8G+WL4zMj2/gAUfpafVK1bOmByui&qb=bG9hZGluZyBidWZmZXIgv6rH0g==
논문 “DNA 기술을 이용한 우리 농축산물 지키기” 김범석
http://avery.rutgers.edu/
http://www.blc.arizona.edu/
http://vm.cfsan.fda.gov/~frf/rflp.html
http://www.biology.washington.edu/fingerprint/

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