[일반생물학] RNA로부터 cDNA 합성, Reverse Transcription, cDNA와 genomic DNA 의 차이

소개글

일반생물학 실습 보고서입니다. RNA로부터 cDNA를 합성하는 Reverse transcription과정에 대한 실습 과정과, 실습 결과 및 고찰에 대해 작성하였습니다. Reverse transcription(역전사)과 Retrovirus(레트로바이러스)에 대한 정보, cDNA와 genomic DNA 의 차이에 대해서도 조사하여 리포트에 작성하였습니다.

목차

1. 실험 목적

2. 실험재료

3. 실험 방법

4. 실험결과 및 고찰

① Reverse transcription(역전사)이란 무엇인가?
- Reverse Transcription이란?
- Retrovirus(레트트로바이러스) 복제의 기작

② cDNA와 genomic DNA 의 차이는 무엇인가?

본문내용

1. 실험 목적
RNA로 부터 cDNA를 합성할 수 있다.

2. 실험재료
Reverse Transcriptase, RT buffer (5x), Random primer (1mM), RNase inhibitor (10 unit/μl)
dNTP (10mM), DTT (0.1M) 60μl (120μl), DEPC-treated water

3. 실험 방법
1> RNase-free tube에 RNA 5 ug을 넣은 후DEPC-treated water를 넣어 전체용량이 11 μl가 되도록 한다.
2> 위 tube에 1μl Random primer를 넣고 70°C에서10분간 반응한다.
*이 과정은 RNA 및 primer의 secondary structure를 없게 하여 primer와 RNA가 specific binding을 할 수 있도록 하는 것이다.
3> 위 tube를 얼음에 5분간 놔둔 후, 잠깐 원심분리하여 tube 벽면의 용액을 모으도록 한다.
4> 다음의 순서로 reagent를 첨가한 후 잘 혼합한다.
RNase inhibitor 0.5 μl
5x RT buffer 4.0 μl
dNTP 1.0 μl
DTT 2.0 μl
RT enzyme 0.5 μl
5> 42°C heat block (또는 water bath) 에서 1시간 반응시킨후, 70 °C 15분간 처리하여 반응을 종료시킨다.
* 본 과정은RNA:cDNA hybrid를 denaturation시키는 과정이다.
6> Sterile water를 20 μl를 넣어 위 반응물을 희석시킨다.

참고 자료

박상대, 분자생물학(2판), 라이프사이언스, 2003
http://www.mun.ca/biochem/courses/3107/images/VVP/Ch24/Box%2024-2-1.jpg