단백질의 정량실험

소개글

Bradford method를 이용하여 BSA단백질을 정량하여 희석된 우유에 들어있는 단백질 농도 계산하여 실제 있어야 하는 양과 비교

목차

1. Introduction
2. 실험재료 및 기구
3. 실험방법
4. 실험결과
5. 토의
6. 참고문헌
7. 퀴즈

본문내용

① BSA를 0.25mg/ml로 희석한다.
※ 10mg/ml stock에서 12.5㎕ 떠서 487.5㎕ dHO에 넣는다.
② 다음 표와 같이 tube에 넣는다. (총 용량 = 800㎕)

③ 각 시료를 표시를 해둔 tube에 3㎕씩 넣는다.
④ 1/25, 1/50, 1/100 로 희석된 우유를 3㎕씩 표시를 해둔 tube에 넣는다.
⑤ 모든 tube에 bradford reagent를 200㎕씩 넣는다.
⑥ vortexing을 한다. 발색이 되도록 약 5분 정도 기다린다. (단, 30분을 넘지 않는다).
⑦ reader plate에 150㎕씩 옮긴다.
⑧ ELISA reader에 넣는다. (전원 켜면 자동으로 tray나옴)
⑨ 595 nm의 파장에서 먼저 standard solution의 흡광도를 측정하여 기록하고, 시료의 흡광도를 측정, 기록한다.
⑩ Standard의 흡광도 수치를 이용하여 standard curve를 그리고 이 curve 에 맞추어 모른 시료 안의 단백질의 양을 거꾸로 계산한다.

④ 우유의 농도 계산하기
추세선의 식이 y = +0.011x + 0.257 이 나왔으므로,
O.D. 즉 y 값이 측정되었으므로, x값을 찾을 수 있다.
※ 1/25희석 : 0.32225 = 0.011x + 0.257 이므로, 약 x = 5.95 ㎍/㎕
이 농도는 1/25로 희석한 우유의 농도이므로 단백질의 농도는 1 : 1/25 = x : 5.95 로 x = 148.75 ㎍/㎕가 나온다. 즉 148.75g/L 가 나온다.
※ 1/50희석 : 0.30625 = 0.011x + 0.257 이므로, 약 x = 4.48 ㎍/㎕
이 농도는 1/50로 희석한 우유의 농도이므로 단백질의 농도는 1 : 1/50 = x : 4.48 로 x = 224 ㎍/㎕가 나온다. 즉 224g/L 이다.
※ 1/100희석 : 0.29725 = 0.011x + 0.257 이므로, 약 x = 3.66 (㎍/㎕)

참고 자료

- http://www.seoulmilk.co.kr/sm?pname=milk.index 서울우유 사이트내 “우유이야기”
- www.cheric.org 화학공학연구전문센터
- 최신 생화학, 김을상 外 6명, 신광문화사