소개글
이번 연구의 목적은 이미 검증된 닭의 원시생식세포의 특정 유전자를 확인하고 더 나아가서 새로운 특정 유전자를 검증하는 데 있다. 그 세부 목적을 보면 다음과 같다.
● 6일령 수정란으로부터 5개의 조직(심장, 간, 신장, 뇌, 생식선)를 분리해 내고,
● In vitro 상태에서 분리한 각 조직으로부터 total RNA를 분리하여 정량하고 QC(Quality control)을 통해 RNA의 분리가 잘 되었는지 확인하고,
● Reverse Transcription-PCR 과정을 통해 cDNA를 합성하고,
● 특정 유전자(Vasa, GapDH gene)가 발현하는가 여부를 확인하기 위해 그 유전자의 PRIMER를 가지고 얻어진 cDNA와 PCR을 통해 증폭여부를 확인하여 그 결과를 얻어낸다.
목차
1. 연구과제
2. 연구목적
3. Introduction
4.Experiment method
4.1. Polymerase Chain Reaction (PCR) 검증 - 1주차 실험
4.2. 닭 배아(6일령)에서 생식세포 특이 유전자 발현 검증 - 2~3주차
5. Result and discussion
6. Reference
본문내용
원시생식세포 배양 기술 확립은 가금의 기초 생리 기작, 특히 성세포의 분화 및 분열을 밝힐 수 있을 뿐만 아니라, 배양 기술을 이용하여 유전자 표적을 수행할 수 있는 기초 자료를 확립할 수 있는 계기가 될 수 있기 때문에 활용도가 매우 높다. 또한 원시생식세포의 배양에 의한 높은 유전자 전이 및 유전체내 삽입과 이를 이용한 효율적인 생식선 카이메라의 생산으로 성장이 빠른 가금 품종의 개발은 앞으로의 농업에 대한 첨단 산업화를 가속시킬 수 있다.
이러한 배경 속에서 이번 실험은 닭의 6일령 배아에서 각 조직을 추출하여 생식선(gonad)의 원시생식세포의 특이성 유전자를 검증하려고 한다. Vasa, GapDH, 그리고 β-actin gene을 이용하여 실험을 하는데 각 유전자의 역할은 다음과 같다.
Vasa gene은 원시생식세포에 특이적으로 발현하는 유전자로서 생식 세포주를 형성하는데 있어서 결함을 일으키는 돌연변이가 발생했을 때에 발현되는 유전자 중 하나이다. 이 유전자가 발현하여 생성되는 VASA 단백질은 DEAD-box family protein의 ATP 의존성의 RNA helicase 구성 요소이며, 특이적으로 생식 세포에서 발견되고, 오로지 배아의 발달 시기동안 생식 세포주에서 발현된다. 아직까지 VASA 단백질의 정확한 역할에 대한 기작은 밝혀지지 않았지만 target mRNA에 붙어서 생식 세포주를 결정하고 그 전사 과정을 조절하는 것으로 여겨진다.
GapDH gene은 ‘housekeeping’ gene이라고 불리우는데, 동물세포의 모든 DNA는 이 유전자를 포함하고 있다. GapDH gene가 발현하는 GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate-dehydrogenase)는 탄수화물의 해당 과정에 있어서 아주 중요한 효소이고, 이는 동일한 4개의 단위체로 구성되어 있다. β-actin gene가 발현하는 ACTIN 단백질은 VASA 단백질과 마찬가지로 모든 동물세포에서 발견되어 세포골격의 구성에 필수적인 단백질이다.
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