제한 효소 반응 실험 (Restriction enzyme reaction)

소개글

화공 기초 실험 - 제한효소로 플라스미드 자르는 일련의 반응 실험 입니다.
사진 및 도표의 깔끔한 정리와 편집이 잘 되어 있습니다.
A+ 받은 실험 레포트 입니다.

목차

1. 실험목적

2. 이론적 배경
(1) Restriction Enzyme
(2) Plasmid
(3) Vector
(4) Agarose Gel Electrophoresis
(5) Restriction enzyme mapping

3. 실험방법

4. Reference

본문내용

1. 실험목적
세균 내의 Plasmid를 세포 밖으로 빼내고 restriction enzyme으로 고리를 끊은 뒤, 가
령 사람의 인슐린을 만드는 데 관여하는 DNA 조각을 이에 끼워 맞춰 다시 세균의 세
포 내로 돌려보내 넣어주면 이종(異種)의 DNA 조각을 가진 재조합 Plasmid는 정상적
으로 증식하고 세균이 분열할 때마다 인슐린을 생성하게 된다. 이때 plasmid vector
systems의 과정과 원리를 이해하는 것이 본 실험의 목적이다. 또한 restriction enzyme
으로 DNA를 절단한 후 DNA fragments의 양의 확인, 분리 등을 위해 electrophoresis
을 직접 실험해 본다. Electrophoresis에는 많은 종류가 있으나 본 실험에서는 DNA
전기영동에서 많이 쓰이는 agarose gel electrophoresis을 사용한다.


2. 이론적 배경
(1) Restriction Enzyme
- DNA 분자내의 특정한 염기서열을 인식하고, 인식한 서열내, 혹은 근처의 특정한
부위에서 double strand DNA를 절단하는 균주특이성이 있는 endonuclease이다.
본래 이것은 세포내로 침입해오는 virus나 외래의 DNA를 절단, 제거하는 세균의
방어기작으로 존재한다. 세균은 자신의 DNA의 인식부위를 methylation 시키기 때
문에 자신의 제한 효소작용으로부터 보호할 수 있다. 제한효소는 그 특성(절단 양
식이나 활성 발현인자 등)에 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ 형의 3군으로 대변된다.
◆Type I restriction enzyme은 활성 발현에 ATP, S-아데노실메티오닌 및 을
필요로 하고, DNA속의 인식 염기배열로부터 떨어진 부위를 절단하는데 그 위치는
일정하지 않다.(약 1,000 base pair 떨어진 위치) - 실험용으로 사용 안함
◆Type II restriction enzyme은 유전공학에서 널리 사용되는 것으로 활성 발현
에 을 필요로 하여 DNA 분자의 특정한 염기배열을 인식하고 그 부위 혹은
인식 염기배열로부터 일정 염기 떨어진 인접 부위를 정확하게 절단한다. 또 이
효소의 인식 염기 배열은 3~6개의 회전 대칭구조를 취하고 있는 경우가 많다.

참고 자료

유전자 진단의 이론과 실제/ 김영설 외 1명/ 도서출판 한의학/ 1999/ pp61~68
분자생물학/ Robert F. Weaver 박상대/ Life science/ 2000/ pp52~55
화공생명기초실험 책자