[생실리포트] 효소의 작용에 미치는 온도, salt의 영향

소개글

효소의 작용에 미치는 온도, salt의 영향 실험 리포트입니다:D

목차

목적
재료
방법
결과
토의
참고문헌

본문내용

목적
시험관의 온도와 salt의 농도를 변화시키면서 효소가 녹말을 분해하는 정도를 관찰하여 α-amylase의 최적 활성온도와 최적 salt 농도를 결정한다.

재료
α-amylase(from Bacillus amyloiquefaciens), 1% starch 용액, 0.1N Iodine 용액, TE buffer (Tris-EDTA buffer), 증류수, 5% 10% 20% NaCl용액, 항온수조(water bath), 시험관, 시험관대, 파이펫, 온도계

방법
<실험1> 효소의 작용에 미치는 온도의 영향
1. 6개의 시험관을 각각 온도와 효소의 첨가 여부를 알 수 있도록 labeling 한다.
2. 각 시험관에 2ml의 녹말용액, TE buffer(pH 7.0) 1ml, 증류수 1ml를 넣는다.
3. 4℃, 40℃, 70℃ 항온수조에 각각 시험관을 두 개씩 넣고 5분간 기다린다. 이 과정을 incubation이라 하는데, 이 과정을 거치는 이유는 각 시험관의 온도를 맞춘 뒤에 효소를 넣어서 반응을 시작하기 위함이다.
4. 각 시험관마다 요오드를 19㎕씩 넣는다
5. 각 수조별로 한 개의 시험관에만 α-amylase를 40㎕씩 넣어 잘 섞고, 수조 속에 다시 넣는다.
6. 5분 후, 각 온도에서 효소가 들어가지 않은 시험관과 비교하여 발색반응이 어떻게 바뀌었는지 관찰하고 α-amylase의 최적 활성 온도를 결정한다.
<실험2> 효소의 작용에 미치는 salt의 영향
1. 4개의 시험관에 각 salt 농도를 labeling 한다.
2. 2ml의 녹말용액, TE buffer pH7.0 용액 1ml를 각각 넣고 잘 섞어준다.
3. 각각의 시험관에 증류수, 5%, 10%, 20% NaCl용액 1ml를 넣고 잘 섞어준다.
4. 70℃ water bath에 5분간 incubation 시킨 후, 요오드 20㎕를 넣고 다시 70℃ water bath에 놓아둔다.

참고 자료

1), 2) 손희도 외, 2007, Hightop 생물II, 두산동아, pp.85, 80