Western blotting을 통한 단백질의 동정

소개글

만점 받은 레포트입니다.
western blot을 통한 단백질의 동정을 위한 실험입니다.
western blot을 위한 과정과 그 과정의 의미에 대해 잘 정리했습니다.

목차

주제 : Western blotting을 통한 단백질의 동정
실험목표 : NC membrane에 transfer된 단백질을 western blotting을 통해 동정해 본다.
실험일시 : 2008년 4월 8일 2:00p.m.~ 6:15p.m.
실험도구 : p20 pipette, pipet aid, transfer 된 NC membrane, 0.5% dry milk, rocker, alkaline phosphotase antibody, TBST, HRPO conjugated antibody, substrate

Introoduction
1. Western Blot
- What is Western blot?
- Nitrocellulose Membrane
2. Monovalent, divalent, multivalent.

Method

Result

Discussion

References

본문내용

주제 : Western blotting을 통한 단백질의 동정
실험목표 : NC membrane에 transfer된 단백질을 western blotting을 통해 동정해 본다.
실험일시 : 2008년 4월 8일 2:00p.m.~ 6:15p.m.
실험도구 : p20 pipette, pipet aid, transfer 된 NC membrane, 0.5% dry milk, rocker, alkaline phosphotase antibody, TBST, HRPO conjugated antibody, substrate

Introoduction
1. Western Blot
- What is Western blot?
Western blot은 항원-항체 반응을 이용하여 여러 단백질의 혼합물로부터 어떤 특정 단백질을 찾아내는 방법이다. 이러한 western blot 방법은 전기영동으로 분리한 단백질의 검출을 쉽게 하고 항원 단백질의 검출 및 sterodid-hormone receptor의 검출 등 각종 분석에 이용되고 있다.
이 방법은 크게 3단계로 나누어 진행되는데, 첫번째로는 분석하고자 하는 단백질 시료 혼합물을 SDS-PAGE를 수행하여 단백질들을 크기에 따라 분리하는 단계가 있다.이 단계에서는 protein이 고유한 3차 구조를 잃고 linear상태가 되어 순전히 분자량에 따라 분리가 된다. 두 번째 단계는 gel 상에 분리된 단백질들을 nitro-cellulose 등의 membrane에 transfer 하는 단계이다. 이 과정에서 단백질로부터 SDS가 제거되고 단백질의 구조가 재생되면서 본래의 항원 결정기를 갖게 된다. 마지막으로, 대상 단백질에 특이적으로 반응하는 항체와, 항체에 반응하는 secondary antibody, 기질을 이용한 검출 단계로 진행된다. 오랫동안 방사성 동위원소를 사용하여 확인하는 방법이 사용되었으나 최근 들어 그보다 덜 위험하고 비슷한 민감도를 가지는 light-based detection 방법, autoradiography, colorimetric detection 방법 등이 사용되고 있다.
이 실험에서 사용한 방법은 colorimetric detection으로, 2차 항체에 결합되어 있는 HRP 효소에 의해 기질이 색깔을 띠는 침전물을 만드는 것을 이용한 것이다.

참고 자료

☆Introduction
western blot transfer 사진 : 2008년 4월 1일자 실험과정에서 직접 찍음
western blot 그림: http://blog.naver.com/glena0204?Redirect=Log&logNo=60027227500
NC membrane 검색 : http://nbbs.naver.com/action/list.php?id=kdhym_0
☆Method
그림 : http://wwwold.ajou.ac.kr/~biotech/study/western/western%20blot.htm
☆Result
AP의 분자량 찾은 사이트 –
http://www.sigmaaldrich.com/catalog/search/ProductDetail/SIGMA/P7923