Bradford Assay

소개글

Bradford Assay

목차

Bradford Assay
Ⅰ. Introduction
1.1. Research goal
1.2. Basic Mechanism of the experiment
Ⅱ. Materials and Methods
2.1. Materials
2.2. Methods
Ⅲ. Results and Discussion
3.1. Result
3.2. Discussion
Ⅳ. Questions

본문내용

Ⅰ. Introduction
1.1. Research goal
Standard curve를 그리고, Unknown sample 과 쥐의 간에서 추출한 단백질의 농도를
측정한다.

1.2. Basic Mechanism of the experiment
Bradford Assay는 Coomassie blue (Bradford dye) 가 단백질에 결합하는 능력에 기초 하는 방법이다. Coomassie blue 는 서로 다른 흡광도를 가진 이온 형태로 존재하는 큰
염색 복합체이다. 이 염료는 음성 전하를 띄는 술폰산기를 가지고 있기 때문에, 이온결합 을 통해서 기본적인 그룹(Arginine, Lysine 잔기) 과 결합하려는 경향이 있다. 또한, 이
염료는 방향족 고리들을 가지고 있기 때문에, 소수성 아미노산 잔기에 소수성 결합을 통 해서 결합하려는 경향이 있다. Coomassie blue 는 원래 붉은색을 띄고 있지만, 염료가
단백질에 붙으면, 최대 흡광도가 595 nm 로 바뀌게 되어 푸른색을 띄게 된다.

Ⅱ. Materials and Methods
2.1. Materials
Bradford reagent (Coomassie blue)
Standard protein : 100 ㎕/㎖ BSA
Unknown protein solution
Protein extract of the rat liver (previous lab)

2.2. Methods
1) 100 ㎕/㎖ 표준 BAS(Bovine Serum Albumin) 과 Unknown 단백질 용액, 쥐의 간에 서 추출한 단백질을 준비한다.
2) 쥐 간에서 추출한 단백질을 D.W 로 희석한다. (X50)
sample 100㎕ / D.W 4.9㎖
3) 튜브에 물, 단백질 샘플, Coomassie blue(Bradford eye)를 아래 표에 주어진 순서대 로 만든다.
4) 반응물들을 모두 혼합시킨 후, 시료들을 잘 섞고 5분 정도 보존해둔다.
5) Tube 1 을 blank 로 사용하여 분광기의 595 nm에서 흡광도를 측정한다.

참고 자료

없음