대장균(E.coli)에서의 Plasmid 추출 실험레포트

*현*

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최초 등록일: 2008.05.05
최종 저작일: 2007.10; 3페이지/ 한컴오피스; 가격 1,000원

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고려대학교 생명공학부 04학번입니다. 실험수업 자료입니다.
Miniprep이라는 소량의 DNA 추출 기법으로 대장균에서 plasmid를 추출하는 실험레포트입니다.

실험 Protocol과 의미 그리고 실험방법에 관련된 정보 각각의 시약들의 역할에 대해 수록되어있습니다.

본문내용

-주제
Minipreparation.

-목적 및 원리
Minipreparation을 이용 E.coli에서 Plasmid DNA를 추출한다. Alkaline Lysis solution을 이용 Cell Lysis를 일으키고 Chromosomal DNA와 크기에서 차이를 보이는 Plasmid DNA를 선별해 낸다. 후에 spectrophotometer와 Electrophoresis를 이용 Plasmid DNA의 순도를 측정하고, 정량적으로 분석한다.

-방법(Protocol)
1) Cell culture-항생제가 포함되어 있는 LB 배지에 접종된 Colony.
2) Cell Harvesting- Cell Down.
3) Cell suspension- 250ml의 P1을 첨가한후 Pipetting 또는 vortexing.
4) Cell lysis-250ml의 P2를 첨가한후 inverting.
5) Neutralization-350ml의 P3를 첨가한 후 inverting -> microcentrifugation.
6) Loading sample to column-원심분리후에 상등액을 spin column.
7) Washing column-700ml의 JW 를 spin column에 첨가한후 원심분리.
8) Washing column-400ml의 JW를 spin column에 첨가. 다시한번 원심분리.
9) Elution-Spin column을 분리하여 Receiver Tube로 이동.

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