UV absorption increase of denatured DNA

목차

UV absorption increase of denatured DNA
Abstract
Introduction
-DNA denaturation & renaturation
Materials and Method
DATA and Result
Disscusion
Reference

본문내용

Disscusion
pH나 온도, 이온세기 등을 이중가닥 DNA의 수소결합을 해체 할 수 있는 조건으로 맞춰주면 두 가닥은 분리된다. 즉, 이중나선이 denaturation되는데 두 가닥은 분리되어 개개의 무작위 coil로 바뀐다. 이번 실험에서는 ‘온도에 의한 denaturation`방법을 이용했는데 이 경우, DNA의 두 가닥이 분리 되는 것을 녹는다는 말로 표현한다. 원래의 이중가닥 DNA는 염기쌍들이 마치 동전을 겹쳐 놓은 것처럼 겹쳐있는데, 열에 의한 denaturation에 의해 이중가닥이 풀리면 염기쌍들은 더 이상 겹친 상태로 있지 않게 된다. 이 상태에서는 260nm에서 DNA용액의 상대적 흡광도가 40%정도 증가하므로 분광광도계를 이용하여 denaturation정도를 측정할 수 있게 된다. 이런 hyperchromic effect는 이중나선상태의 DNA에서 염기들의 방향족 고리들이 겹쳐 쌓일 때 π전자를 이용하여 상호작용하기 때문에 일어난다. Stacking force라고 하는데 염기들이 자외선을 흡수하는 현상 역시 π전자들이의 전이에 의해 이루어지는데, 겹쳐 쌍인 상태에서는 이러한 전이가 감소되기 때문에 260nm파장의 빛을 덜 흡수하는 것이다. 이중가닥이 분리되면 자외선 흡수억제가 사라져 흡광도가 증가하게 된다. Stacking force가 사라져서 흡광도가 증가되는 것이다. 따라서 흡광도의 증가는 가닥의 분리정도와 일치되며 그 중간점의 온도를 melting point(Tm)이라 한다.
이번 실험에선 60~70℃사이의 O.D값이 확 뛴다고 가정 하에 Tm값을 구했다. 하지만 기대치만큼

참고 자료

Nelson & Cox Lehninger Biochemistry 4th edition 2004 by Freeman pp363~366