Alkaline lysis, 전기영동, 제한효소지도

소개글

Plasmid 분리, Plasmid 전기영동 및 제한효소 절단, 제한효소 지도 작성하는 것 까지 실험한결과레포트입니다

목차

1. 이론
- Alkaline lysis의 원리
2. 실험방법
- Plasmid 분리
- Plasmid 전기영동 및 제한효소 절단
3. 결과

본문내용

1. 이론
- Alkaline lysis의 원리
a. 세포벽을 깬다. 이 때 세포막은 유지되도록 한다. 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 한다. 때로는 lysozyme을 쓰기도 한다.
b. 세포막을 조심스럽게 깨서 크기가 큰 chromosomal DNA가 너무 잘게 조각나는 것을 방지하면서 용액에 DNA 를 노출시킨다. SDS라는 detergent가 세포막을 녹여버리면서 안에 있던 세포 내용물이 용액으로 흘러나오게 된다. 이때 바로 alkali 용액에 노출된 DNA는 모두 denature 된다. 그러나 크기가 작은 supercoiled plasmid DNA는 그다지 심각하게 denature되지 않는 성질을 이용하는 것이다.
c. pH를 급격히 7.0까지 복구시키면 크기가 작고 supercoiled form을 유지하고 있던 plasmid는 비교적 renaturation이 잘 되지만, chromosomal DNA는 미처 renature되지 못하고 엉기게 된다. 이렇게 엉긴 chromosomal DNA를 원심분리로 제거한다. 그러면 상층액에 plasmid DNA가 있게 된다.

-전기영동
DNA의 젤 전기영동 장치는 시료를 넣을 수 있는 작은 홈이 있는 아가로스 젤을 이용한다. 여기에 전하를 흐르게 하면 음전하를 띤 DNA 분자들은 아가로스를 침투하면서 이동한다. 젤은 분자들이 복잡한 그물 형태를 이루고 있어서 거대 분자들은 좁고 뒤틀린 통로를 통해 비집고 이동하게 된다. 그 결과 작은 분자들은 쉽게 지나 갈 수 있으며 결과적으로 이동속도는 분자량 M이 감소함에 따라서 증가한다.

참고 자료

없음