Column chromatography를 위한 1M의 Tris-HCl buffer 버퍼 제조

소개글

인트로덕션도 필요한 부분 모두 들어가 있고
실험방법도 아주 상세하게 적었습니다.
실험결과에도 넣어야 할 각 수치를 표로 만들어서 식을 세워서 푼 방법을 아주
꼼꼼하게 적었습니다.
디스커션 내용도 좋구요^^
A+받았습니다~

목차

1. Subject
2. Object
3. Introduction
4. Materials & Method
5. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

① 실험주제
Column chromatography를 위한 1M의 Tris-HCl buffer 제조

② 실험목표
1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO4 Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl농도의 elution buffer를 만든다.

③ Buffer의 개념
외부로부터 어느 정도의 산이나 염기를 가했을 때, 영향을 크게 받지 않고 수소이온농도를 일정하게 유지하는 용액.
완충액이라고도 한다. 일반적으로 약한 산과 그 염의 혼합용액 또는 약한 염기와 그 염의 혼합용액이 완충작용을 한다.

예를 들어 약한 산인 아세트산과 그 염인 아세트산나트륨의 혼합액이 있다. 아세트산에 대해서는

CH3COOH­↔ CH3COO-＋H+ … ①

과 같은 해리평형(解離平衡)이 성립하며, 아세트산이온의 농도는 매우 작다. 한편, 아세트산나트륨은

CH3COONa → CH3COO-＋Na+ … ②

과 같이 대부분 해리한다. 따라서 혼합액 속에는 많은 양의 아세트산분자와 아세트산이온, 나트륨이온, 그리고 적은 양의 수소이온이 존재한다. 따라서 용액은 약한 산성을 띠며, 용액 속의 아세트산이온의 농도는 아세트산나트륨의 농도에 따라 결정된다.

이 용액에 외부에서 산이 가해져 수소이온(H+)이 증가하면, ②식에서 생긴 대량의 CH3COO-과 반응하여 ①식의 평형에 의해서 오른쪽에서 왼쪽으로 반응이 진행된다. 즉, 증가한 수소이온(H+)은 아세트산이온(CH3COO-)과 결합하여 아세트산분자(CH3COOH)가 되면서 용액의 수소이온농도는 거의 변하지 않는다. 반대로 염기를 가해 수산화이온(OH-)이 증가하면 용액 속의 수소이온(H+)이 중화되어 줄어든다. 하지만 ①식의 평형에 따라 왼쪽에서 오른쪽으로 반응이 진행되어 다시 수소이온(H+)을 생성하면서 용액의 수소이온농도는 거의 일정하게 유지된다. 이와 같은 작용을 완충작용이라 하며, 화학반응은 물론 생체 내에서도 중요한 구실을 한다.

참고 자료

강태종(2005), 대학화학, 녹문당
강정아인(2006), 단백질 실험노트, 월드사이언스
David T. plummev(1993), An introduction to practical biochemistry(2nd Ed.), pp. 35-39
Oxtoby 외(2004), Principles of Modern Chemistry(5th Ed.), THOMSON. pp. 427-433
http://www.takara.co.kr/pds/magazine/pdf/26/h_1.pdf