유전자 조작실험 Ⅱ, 재조합 대장균의 선별과 배양 및 생성된 단백질의 분리 및 분석

소개글

유전자 조작실험 , 재조합 대장균의 선별과 배양 및 생성된 단백질의 분리 및 분석의 관한 보고서 입니다

목차

1. 실험제목: 유전자 조작실험 Ⅱ, 재조합 대장균의 선별과 배양 및 생성된 단백질의 분리 및 분석
2. 실험목적
3. 실험원리와 실험방법
4.실험방법
5. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목: 유전자 조작실험 Ⅱ, 재조합 대장균의 선별과 배양 및 생성된 단백질의 분리 및 분석
2. 실험목적: 특정 유전자가 삽입되어 있는 plasmid DNA를 숙주세포인 competent cell (E. coli XL1-blue)에 도입시키고 재조합 되어진 DNA를 보유하고 있는 숙주세포를 선별하는 방법을 배운다. transformation시 사용되어지는 방법은 calcium chloride and heat shock method이다.

3. 실험원리와 실험방법
♣IPTG(Isopropyl-β-D-Thiogalactopyranoside)


Lactose operon의 경우 promoter다음에 operator위치에 평소에는 Repressor가 결합하고 있는 상태이다. 이 때 allolactose를 넣어주면 이것은 repressor와 결합하여 Lac operon유전자로부터 떼어내게 되고 이어 단백질 합성이 일어나는 것이다. 이 때 쓰이는 allolactose를 inducer라 하고 이와 비슷한 구조를 가지고 같은 기능을 보이는 화합물중 대표적인 것이 바로 IPTG이다. 다시말해 IPTG는 Lac operon에서 betagalactosidase가 만들어질 때 inducer로 사용되는 물질이다.
Allolactose 대신 인공적인 화합물을 이용하는 이유는 IPTG의 경우 세포내에서 분해가 되지 않기 때문에 항상 같은 양의 발현을 유도할 수 있기 때문이다. E.coli에서 쓰이는 단백질 발현 벡터 등에는 프로모터 뒤에 위 Lac operator가 있어 단백질을 발현하고자 할 때 IPTG를 넣어주어야만 충분한 양이 나오게 된다.

참고 자료

http://kin.naver.com/browse/db_detail.php?d1id=11&dir_id=110205&docid=608234
http://blog.naver.com/ozooena/80000929380
http://cafe.naver.com/moleimmunology.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=682