제한효소에 의한 DNA의 절단

소개글

모 여자 대학 일반생물학실험 리포트 양식입니다.
A+ 받았습니다.

목차

< PURPOSE >

< INTRODUCTION >
1. 제한효소

2. 제한효소를 이용한 DNA의 절단

< MATERIALS >

< METHOD >
1. 단일 제한 (single digestion)

2. 중복 제한 (double digestion)

< RESULTS >

< DISCUSSION >
1. standard graph 그리기(marker의 size와 Rf값 이용)

2. 제한절편의 크기 판정

3. 앞의 표에서 나타난 제한효소 인식 부위를 참조하여 DNA의 이중나선을 EcoRI로 제한하였을 때 잘린 부위의 염기서열은 어떤 형태를 하겠는가(양 가닥 모두를 고려함)?

4. DNA의 염기는 4가지 (A, T, C, G)로 되어 있다. DNA의 염기서열 중 EcoRI부위가 발견될 확률은 얼마인가?

5. 전기영동 gel의 각 lane에 나타난 DNA 절편의 크기 합은 항상 동일해야 한다. 실제로 동일한가? 아니면 어떻게 설명하겠는가?

< REFERENCES >

본문내용

SUBJECT: 제한효소에 의한 DNA의 절단

<PURPOSE>
시험관 내에서 (in vitro) 유전자 조작을 행할 때 쓰는 가장 기본적인 도구인 제한효소 (restriction enzyme)와 제한효소의 제한기작을 알아보고 플라스미드를 제한 절편들로 잘라 다시 맞추는 과정을 수행한다.

<INTRODUCTION>
1. 제한효소
DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미하는데, 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction endonuclease)이며, DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기(adenine, cytosine)를 메칠화시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다.

(생략)

2. 제한효소를 이용한 DNA의 절단
- 제한효소 1 unit는 1 μg의 DNA를 최적 온도에서 한 시간에 절단할 수 있는 양이다. 상품화된 효소는 효소마다 다르지만 대개 10 units/μl 내외의 농도로 공급된다. 제한효소 처리 반응은 절단하려고 하는 DNA, 반응완충용액, 제한효소로 구성된다. 각각의 성분에 대하여 다음과 같은 점들을 고려해야한다.

참고 자료

-http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/restriction_enzyme.php
-http://imagesearch.naver.com/search.naver?where=idetail&query=%C1%A6%C7%D1%C8%BF%BC%D2&from=image&ac=-1&sort=0&res_fr=0&res_to=0&merge=0&start=2&a=pho_l&f=nx&r=2&u=http%3A%2F%2Fblog.naver.com%2Fmecapyo%3FRedirect%3DLog%26logNo%3D
-http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=s0ui/5wjtbWwmdi55//Mm7HcsX4Qks3j&qb=wPyx4iC/tbW/wP3G7SDFqbHiIMfV90011384262