형질전환, 이론은 짧으나 디스커션은 매우 자세합니다.

소개글

자세한 결과해석, 디스커션을 원하는 분께 적절합니다.

목차

1. 실험제목
2. 서론
①Transformation이란
②Competent cell
③Plasmid
④ 재조합의 종류
⑤항생제를 이용한 selection
⑥CFU (Colony Forming Unit)
3. 재료및 방법
4. 결과
5. 결과분석 및 고찰

본문내용

-결과분석


일반적으로 1ug당 형성되는 transformed colony의 수는 약 107~108 개다. 이번 실험에서 우리 조의 CFU값은 2.12X106 이므로 107를 기준으로 했을 때 약 1/5 정도의 CFU가 생성이 되었다. 배지에 약 1500개의 colony가 생성되면 비교적 잘 수행된 실험이었다고 판단할 수 있는데, 우리조의 배지에서 생성된 총 colony개수는 1060개이므로다소 부족한 감이 있지만 만족할 만한 실험 결과라고 생각한다. 실험과정을 크게 나누어 보면, competent cell에 DNA를 주입하는 과정과, 0℃에서 cooling, 42℃ water bath에서 heat shock, 0℃에서 cooling, LB broth 투여후37℃에서 20분간 incubation, 배지에 도말 로 나눌 수 있다. 이 과정 중에서 가장 결정적인 과정은 42℃에서 heat shock 을 주는 과정이라고 할 수 있는데, 왜냐하면 이 단계에서 외부의 DNA가 cell내로 들어가기 때문이다. Heat shock을 가하면 E.coli의 membrane potential 감소하고 감소한 membrane potential 이 DNA의 cell내로의 유입을 촉진하게 된다.(Panja S, Saha S, Jana B, Basu T. Role of membrane potential on artificial transformation of E. coli with plasmid DNA. J Biotechnol. 2006 Dec 15;127(1):14-20. Epub 2006 Jun 23.) 이 과정에서 얼마나 많은 수의 cell로 DNA가 들어가느냐에 따라서 실험의 효율, CFU값이 결정된다. 과도한 열을 가하게 되면 Cell이 파괴되고, 너무 낮은 열을 가하면 heat shock 가 제대로 일어나지 않아 DNA의 cell내부로의 유입이 줄어들게 될 것이다. 실험 시, 0℃에서 cooling 후 42℃ water bath로 옮기게 되는데, 우리조의 경우 cooling 과정에서 ice bucket에 cell 이 담김 tube를 깊숙이 박아 다소 얼어 있는 상태에서 water bath에 넣게 되었다. 그렇다면 희석된 용액의 중심부에 있는 cell은 충분한 heat shock을 받지 못하여 DNA가 cell 내부로 원활히 유입도지 못했을 것이다. 부가적으로 미세하지만 spreading 시 spreader에 묻은 잔량도 결과 값의 감소에 영향을 미쳤을 것이라 생각한다

참고 자료

<논문>
1. Panja S, Saha S, Jana B, Basu T. Role of membrane potential on artificial transformation of E. coli with plasmid DNA. J Biotechnol. 2006 Dec 15;127(1):14-20. Epub 2006 Jun 23.
2. Sun D, Zhang Y, Mei Y, Jiang H, Xie Z, Liu H, Chen X, Shen P. Escherichia coli is naturally transformable in a novel transformation system. FEMS Microbiol Lett. 2006 Dec;265(2):249-55. Epub 2006 Oct 27.
<인터넷>
1. http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_17.php