[생화학 실험] 단백질 정량 (Lowry method, Bradford Assay)

소개글

1. 실험목적
- 단백질은 매우 중요한 식품의 구성성분이다. 단백질 정량법의 두 가지 방법, Lowry method와 Bradford Assay를 이용하여 단백질을 정량하고, 최종적으로 단백질의 농도를 구한다. 두 가지의 실험방법은 각각 특성이 있으므로 시료에 따라 알맞은 방법을 선택하거나 상호보완적으로 사용할 수 있다. 우리는 이번 실험을 통해 우유의 단백질 양을 구하려 한다.

목차

1. 실험목적
2. 실험재료 및 방법
3. 실험결과
4. 실험결과 토의

본문내용

2. 실험재료 및 방법

1) 실험재료

⑴ Lowry Method
- 0.03% BSA용액, Reagent A,B,C, 2N Folin-phenol reagent,
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⑵ Bradford Assay
- 0.1% BSA용액, D.W, Bradford용액, 우유, vortex mixer
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2) 실험방법

⑴ Lowry Method
- ① 10개의 16*150mm test tubes에 0.03% BSA(Bovine Serum Albumin)용액 0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 1.0ml 를 각각 넣는다. 우유1.0ml도 준비 한다.
② 증류수를 넣어 전체 부피가 1ml 되게 한다.
③ Reagent A 15mL, Reagent B 0.75mL, Reagent C 0.75mL를 Erlenmeyer flask에서 완전히 혼합한다.
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⑵ Bradford Assay
- ① 튜브에 증류수를 1mL, 0.8mL, 0.6mL, 0.4mL, 0.2mL, 0.1mL, 0mL 넣은 후 0.1% BSA 용액을 넣어 전체 부피가 1mL가 되도록 한다. 우유1.0mL도 준비 한다.
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4. 실험결과 토의

Lowry method 와 Bradford assay 는 실험 과정은 거의 비슷하나 그 실험 원리에 차이가 있다.
Lowry method 는 가장 널리 사용되어지는 단백질 정량법 으로 알칼리 조건하에서 Cu2+는 단백질의 peptide bonds 와 complex를 형성하고
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Bradford assay 는 Lowry method 보다 더욱 정밀하고 더 빠르다는 장점이 있다. 또한 Lowry method처럼 시약들에 의한 간섭효과도
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추세선을 통한 결과값은 2.56%로 다행히 괜찮게 나오긴 했지만 이것은 실험에 상당한 실수가 있었던듯하다. 위에서 말했던 큐벳을 집을때 손에 있는

참고 자료

1. 한국 생화학회, 1997, 실험생화학, 탐구당 p. 53-72, p. 171-206
2. http://www.animal.ufl.edu/hansen/protocols/LOWRY.htm
3. 김경삼 외 2인, 1996, 식품분석, 세종출판사, p.87-94
4. http://www.seoulmilk.co.kr/