[분자생물학실험] 단백질발현 확인

소개글

8주간의 단백질 발현 실험을 보고서로 쓴것 입니다.

목차

1.실험목적
2.실험과정 및 원리
3.실험결과
4.고찰

본문내용

1. 실험목적
DNA cloning 전 과정을 이해하고 익힌다.
1) Enzyme digestion and gel loading
: Colning을 하기 위해 vector와 insert를 제한효소로 자를 수 있다.
2) Gel extraction and ligation
: 자른 DNA를 agarose gel로부터 purification을 통해 분리할 수 있다.
: vector와 insert를 T4 DNA ligase를 가지고 ligation할 수 있다.
3) Transformation
: ligation 시킨 plasmid를 competent cell에 transformation할 수 있다.
4) DNA prep
: transformation한 colony에서 DNA를 얻어서 enzyme digestion을 통해 ligation이 제대로 이루어 졌는지 확인 할 수 있다.

2. 실험 과정 및 원리
이번 실험은 총 5주에 걸친 실험이었다. 일단 cloning을 하기 위한 준비 작업으로 vector외 insert를 제한요소를 사용하여 잘라서 준비한다. 잘려진 DNA를 agarose gel 전기영동 한 후, gel의 맞는 부분의 size를 추출하여 DNA의 농도를 추측해본다. purification 한 DNA를 T4 DNA ligase를 가지고 ligation을 하고, competent cell에 transformation을 한다. (E. coli를 사용) Ampicillin을 이용한 항생배지에 배양한 후, colony를 3개를 취해서 액체배지에 배양을 시킨다. mini-prep을 하여 plasmid DNA 분리하고, ligation이 잘 되었는지 확인한다. 마지막으로 E. coli에서 단백질을 발현 시켜 전기영동을 하여 확인한다.

참고 자료

없음