[생화학]Plasmid DNA 분리

소개글

Plasmid DNA 분리에 관한 레포트 입니다

목차

1. Purpose
2. Introduction
3. Meterial & Methods
4. Result
5. Discussion

본문내용

1. Purpose
- 집어 넣었던 plasmid를 다시 꺼내어보자.
- 이를 통해 biomolecule을 분리해 내는 방법을 알아보자.
2. Introduction

형질전환된 bacteria로부터 plasmid DNA를 분리하는 것은 recombinant DNA를 제조하기 위한 첫 번째 단계이다. 분리된 plasmid DNA는 다음과 같은 용도에 사용된다.
1) Cloning genes
2) mutagenesis
3) nucleic acid hybridization을 위한 probe 제작
Plasmid DNA 분리법에는 여러 가지가 있으나 공통적인 세 단계는
1) plasmid가 형질전환된 bacteria를 대량 배양한다.
plasmid replication이 relaxed, stringent control을 받기 때문에 plasmid에 따라 배양조건을 달리한다.
2) bacteria를 용해시켜 impure DNA 상태로 회수한다.
bacteria culture 용액을 원심분리하여 bacteria만을 침전시킨 후 pellet을 lysozyme과 detergent SDS가 포함된 alkaline lysis buffer에 resuspend한다. Large-size plasmid DNA (15 kb 이상)의 경우 DNA가 쉽게 조각날 수 있기 때문에 lysis 조건을 매우 조심스럽게 다룬다. Alkaline 조건에서 bacterial DNA는 denature되며 용액에서 침전된다. 그러나 plasmid DNA는 supercoil 상태이기 때문에 denaturation이 크게 일어나지 않는다. Lysis buffer를 neutralize하면 침전된 bacterial DNA는 renature가 거의 일어나지 않으나 plasmid DNA는 renature되어 supercoil 구조를 다시 형성한다.

참고 자료

http://ynucc.yu.ac.kr/~mmblab/
http://genetics.hannam.ac.kr/lecture/GELab2002
http://dric.sookmyung.ac.kr/RCBH/login.htm
http://dric.sookmyung.ac.kr/RCBH/tech/rcbh_tech_list1.htm