Co-immunoprecipitation SDS-PAGE Transfer Western Blot and ECL Rho family Stacking gel과 running gel의 pH차이

소개글

Co-immunoprecipitation(Co-IP)에 관한 실험으로 Co-IP(Co-immunoprecipitation), SDS-PAGE(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) and Transfer, Western Blot and ECL(Enhanced chemiluminescence), Stacking gel과 running gel의 pH차이, Rho family에 관한 내용이 있습니다.

목차

1. Abstract
2. Results & discussion
3. Stacking gel과 running gel의 pH차이
4. Rho family
5. Reference

본문내용

1. Abstract
(1) Co-IP(Co-immunoprecipitation)
Antigen은 면역반응을 유발하는 물질이며 antibody는 antigen의 자극에 의해 생성되는, antigen과 특이적으로 반응하는 물질이다. Antibody는 해당 antigen에 대해 특이성을 나타내는데 antigen과 부분적으로 동일한 물질들과는 교차반응을 하지만 antigen과 구조적으로 전혀 다른 물질들과는 반응하지 않는다. Immunoprecipitation은 이 원리를 이용하여 Protein 혼합물에서 antigen이나 antigen과 친화성을 가진 물질을 특이적으로 분리한다. Cell lysate과 같은 Protein 혼합물에서 antibody는 해당 antigen과 결합하여 complex를 형성하고, 이 complex는 Sepharose bead가 결합된 protein A나 protein G와 결합하여 검출된다. 이런 방법을 이용하여 서로 다른 protein들 간의 상호작용을 알아내는 방법이 Co-immunoprecipitation이다. Co-IP는 기본적으로 IP와 같은 방법으로 실행되지만 특정 antibody와 복합체를 형성하는 antigen이 그것에 결합한 다른 protein과 함께 복합체를 형성하게 되는 점이 IP와는 다르다. 이를 통해 이 protein이 자신이 결합한 antigen과 상호작용함을 알 수 있다.
* 실험과정(올려주신 프로토콜의 실험방법의 순서로 되어있습니다.)
1) ~ 9) : Cell lysate을 준비하는 단계
10) : Cell lysate을 e-tube에 넣고 부피를 맞춰주는 단계
11) ~ 12) : Antibody를 넣어주어 cell lysate 속의 Pix와 결합하게 한다.
13) : Bead를 가진 Protein A-sepharose 4B를 넣어 Pix와 anutibody의 복합체에 결합하게 한다.
14) ~ 16) : 원심분리하여 상등액을 버리는 과정을 반복하여 Pix-antibody-Protein A-sepharose 4B 복합체를 남긴다.

참고 자료

① Balch, W. E. Der,『Regulators and effectors of small GTPases, Part D. Rho Family』, San Diego : Academic Press, 2000.
② Bruce Alberts,『Essential cell biology』, 2nd ed, New York, NY : Garland Science Pub, 2004.
③ Geoffrey M. Cooper,『The cell : a molecular approach』, 4th ed, Washington, D.C. : ASM Press, 2007.
④ Robert F. Weaver,『Molecular biology』, 3rd ed, Boston : McGraw-Hill, 2005.