SDS-PAGE & Bradford assay

소개글

* Understanding the principles of polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)
* Construct standard curves and determine protein concentrations by the Bradford method

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동 실험자
4. 목적
5. 원리
6. 방법
7. 결과
8. 고찰
9. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목
SDS-PAGE & Bradford assay

2. 실험일자
2006년 5월 8일

4. 목적
* Understanding the principles of polyacrylamide gel electrophoresis(PAGE)
* Construct standard curves and determine protein concentrations by the Bradford method

5. 원리
* SDS-PAGE
Acrylamide를 가교제 (cross-linker)로 중합한 polyacrylamide gel은 acrylamide와 가교제의 농도및 비율에 의해 gel내 미세통로의 크기를 조절할 수 있어 다양한 크기의 생체 분자들을 분리할 수 있을 뿐만 아니라 높은 정밀도와 고분해능으로 인해 오래 전부터 단백질, 핵산 등의 분리에 널리 사용돼 왔다.
Polyacrylamide gel은 acrylamide 측쇄 기능기가 N,N`-methylene bisacrylamide와 같은 2개의 기능기를 가지는 화합물에 의해 비가역적으로 중합되어 형성된 polymer이다 (그림1).
가교제로는 N,N`-methylene bisacrylamide이 (일반적으로 bisacrylamide라 한다) 많이 사용되고 있으며, 또는 N,N`-bisacrylylcystamine (BAC), N,N`-diallyltartardiamine (DATD), Ethylene diacrylate (EDIA) 등도 특수한 목적으로 사용되기도 한다. 생체물질의 효과적인 분리 범위는 polyacrylamide의 농도와 가교제와의 중합 정도에 의해 결정되며 가교제에 의해 중합되어 생긴 gel은 적절한 강도와 탄성을 유지하고 polypeptide가 통과할 작은 구멍을 형성한다. 이 구멍의 크기는 가교제와polyacrylamide의 비율이 증가할수록 감소하여 약 1:20 정도에서 가장 작게 된다. 대부분의 polyacrylamide gel은 1:29의 몰 비율로 제조하며 사용하고 있으며 이 비에서 분자량이 3% 정도의 차이가 있는 polypeptide를 분리할 수 있다. Polyacrylamide gel은 %T와 %C로 표현

참고 자료

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*http://cafe.naver.com/moleimmunology.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=353
*http://www.kangwon.ac.kr/~centrlab/gigi4_9.html