[생명] 자외선 흡광도에 의한 DNA 농도 측정 및 LAMBDA DNA의 온도에 따른 흡광도의 변화관찰 결과보고서

소개글

자외선 흡광도에 의한 DNA 농도 측정 및 LAMBDA DNA의 온도에 따른 흡광도의 변화관찰실험

결과보고서입니다.

목차

▲ 실험제목
▲ 실험목적
▲ 결 과
▲ 토의내용
▲ 참고자료

본문내용

▲ 실험제목
자외선 흡광도에 의한 DNA 농도 측정 및 LAMBDA DNA의 온도에 따른 흡광도의 변화관찰

▲ 실험목적
• 시료의 흡광도 측정 후, 이로부터 DNA 농도산출, 그 원리를 이해함.
• 시료의 온도변화에 따른 흡광도 변화를 통해 DNA 상태변화를 확인함.

▲ 결 과
• DNA 농도 측정 결과
구 분
10배 희석
50배 희석
STANDARD
O.D(A260)
0.068
0.045
1.099
O.D(A280)
0.035
0.028
0.626

∘ DNA 농도(㎍/㎖) = 측정된 A260 × 50 × 희석배수
∙ 10배 희석한 DNA 샘플의 농도 : 0.068 × 50 × 10 = 34㎍/㎖
∙ 50배 희석한 DNA 샘플의 농도 : 0.035 × 50 × 50 = 112.5㎍/㎖
∘ 순수도 : A260 / A280
∙ STANDARD : 1.099 / 0.626 = 1.76 ＜ 1.8
∙ 10배 희석한 DNA 샘플의 순수도 : 0.068 / 0.035 = 1.94 ＞ 1.8
∙ 50배 희석한 DNA 샘플의 순수도 : 0.045 / 0.028 = 1.61 ＜ 1.8
• 온도에 따른 DNA 상태 변화
• Tm값
∘ 90℃이후 흡광도의 변화가 없다고 가정
∙ 70℃ 흡광도는 1.094, 90℃ 흡광도 1.263 / 흡광도의 ½값은 1.1785
∙ 80℃~90℃에서 흡광도 변화 그래프 : ｙ=0.0159ｘ-0.168
1.17885=0.0159ｘ-0.168 / ∴ｘ=84.7 / Tm=84.7℃

▲ 토의내용
• DNA 농도 측정시 1.8 미만의 순수도가 나온 샘플이 있음
∘ 순수한 DNA의 경우 260nm와 280nm에서 흡광도 비율은 1.8 / 실험결과 10배 희석한
DNA 샘플을 제외하고는 1.8미만이므로 DNA시료에는 단백질이나 Phenol이 있다는 것
∙ 같은 샘플을 희석하여 사용하였으므로 순수도가 다르게 나온 것은 실험상 오차로 봄
∘ 온도에 따른 DNA 상태 변화에서 Tm값을 구할 때 흡광도가 일정하게 증가하지 않음
∙ 흡광도의 변화가 30℃~40℃, 60℃~70℃에서 감소
- 30℃~70℃ 실험상 오차로 판단 : 온도가 안정적으로 증가하는 70℃부터 흡광도가
증가하는 것으로 계산함.

참고 자료

• http://www.kjcp.co.kr/note/lecture%20note/basic-exp/basic-note/Chapter%205%20%
20Instrumental%20handling.htm
• Molecular Biology(分子生物學 / David Freifelder / 아카데미서적 / p.91