[공학]전기영동

소개글

전기영동의 종류, 원리, 방법에 대해서 자세한 조사
예비레폿으로도 사용가능

목차

1. 1차원(one-dimensional)겔 전기영동
(1) 아가로오스 겔 전기영동
(2) 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동
(3) SDS-PAGE (SDS-폴리아크릴아마이드 겔 전기영동)
(4) 간헐 전기장(pulsed field) 겔 전기영동
(5) 면역체 전기영동 (immunoelectrophoresis)
① 카운터 면역체 전기영동 (counter immunoelectrophoresis)
② 존 전기영동/면역체 확산(immunodiffusion)
③ 로켓 방법(rocket technique)
2. Isotachophoresis
3. Isoelectric focusing (IEF)와 2차원 겔 전기영동
4. 자유용액에서의 전기영동
5. 기타 전기 영동법

본문내용

1. 1차원(one-dimensional)겔 전기영동
Ⅰ. Agarose gel 전기영동
전기영동(Electrophoresis)이란 특별한 매질(agarose or acrylamide-agar와 같이 용액을 굳히는 역할을 하며 agar보다 순도가 높다.)을 이용하여 고분자 물질(DNA나 단백질)을 분리하는 방법이다.
아가로스(agarose)는 갈락토스(galactose)와 겔리듐 아만시(Gelidium amansii)의 한천(agar)으로부터 유도된 3,6-안하이드로갈락토스 단위체들(anhydrogalactose unit)로 구성되는 천연의 다당류이다. 겔은 전분 겔과 유사한 방법으로 끓는 물에 건조한 중합체를 넣고 상온에서 식힘으로써 얻어진다. 전분 겔보다 다공성 구조이며 적절한 강도를 가진다. 아가로스 겔(agarose gel)에서의 전기영동은보다 진정한 의미의 전기영동으로써 하전된 분자들은 전기장의 영향에 의해 이동하나지지 물질에 의해 저지되지 않는다. 아가로스 겔을 이용한 전기영동은 가장 큰 거대 분자와 그 복합체인 바이러스, 효소 복합체, 지질단백질(lipoprotein), 핵산(nucleic acid)등의 전기영동에 이용되고 있다.
DNA를 분리, 정제하여 확인하는 방법으로는 아가로스 겔을 이용하는 전기영동법이 보편적으로 사용된다. 이 방법은 간단하고 소요되는 시간이 짧을 뿐 아니라 밀도, 기울기, 원심 분리법으로는 분리할수 없는 DNA 조각들의 혼합물을 분리할 수 있다. 그 뿐만 아니라 겔상에서 DNA는 ethidium bromide와 같은 형광성 시약으로 처리하면 염색되므로 자외선 하에서 DNA를 직접 관찰할 수 있다. 아가로스 겔을 통한 DNA의 이동속도는 DNA 분자의 크기, 아가로스의 농도, DNA의 형태, 전류의 세기, 염기 조성 및 온도 등에 좌우된다.


<Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들>

1) DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
2) Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
3) DNA 형태(구조)에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA가 가장 빨리, 그다음 linear DNA, open circular DNA의 순으로 빠르게 이동한다.
4) 부하되는 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다.
5) 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미친다.
6) Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15% 정도 감소시킨다.
7) 전기영동 완충용액의 성분과 이온강도도 전기영동 속도에 영향을 준다.

참고 자료

없음