[분자생물학]분자생물학 실험- Protein expression & Purification

소개글

분자생물학 실험- Protein expression & Purification 입니다.

* Fusion protein을 만들기 위한 cloning 이해
* Lac promoter 갖는 플라스미드의 발현 이해
* fusion protein 분리법 이해

목차

purpose
principle
material
method
result
consideration
reference

본문내용

1.SDS-PAGE
단백질의 chain의 수나 크기를 밝히기 위하여 사용된다. 실험을 하기 전에 단백질 표본을 2-mercaptoethanol 과 SDS로 처리를 해준다. 2-mercaptoethanol은 단백질의 disulfide bond를 끊어 주게 되고, SDS는 단백질에 binding 하여서 polypeptide를 anionic(negative charge)하게 만들어 준다. 이렇게 처리된 단백질은 folding 모양이나 고유의 charge에 상관없이 peptide chain의 크기에 따라서만 이동하게 된다. 그림 4-7을 보면 stacking gel과 resolving gel 2개의 gel이 필요하다. stacking gel 에서는 각각의 분자들이

2.IPTG ( isoprophyl β-D-thiogalactoside)
Lac promotor의 inducer로 작용을 하는 Allolactose와 비슷한 구조를 가지고 같은 기능을 하는 것이 IPTG이다. 그래서 우리가 사용한 promotor를 활성화시키기 위하여 IPTG를 넣어준 것이다. Allolactose를 넣어주지 않고 IPTG를 넣어주는 이유는 IPTG는 세포내에서 분해가 되지 않아서 항상 같은 양을 발현 할 수 있게 해주기 때문이다.

3.NETN buffer
NaCl, EDTA, Tris-HCl, NP40 으로 이루어진 buffer이다. NaCl은 염을 제공하여 주고, EDTA는 Ca 킬레이터

참고 자료

Gersten, D.M.(1996). Gel Electrophoresis (Essential Technique Series). New York: Wiley
http://kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=FwriHRFTowmMXRbG69IiIsCijOoJTIIH&qb=c2RzIHBhZ2U=
http://www.fiu.edu/~animals/gel_solutions.html
http://www.elpisbio.com/sub/support/protocols/Staining.htm