[생명과학]Western blot을 이용한 Alkaline Phosphatase 검출

소개글

SDS-PAGE후
western blot을 이용한 단백질 검출 실험에 관한 것입니다.

목차

1. Subject
2. Object
3. Materials
4. Introduction
5. Methods
6. Result
7. Discussion
8. Reference

본문내용

1. Subject

Western blot을 이용한 Alkaline phosphatase 검출


2. Object

SDS-PAGE에 의해 분리한 protein mixtures를 nitrocellulose membrane에 transfer하고 western blot을 통해 alkaline phosphatase를 검출한다.


3. Materials

Transfer buffer : 25mM Tris base, 0.2M glycine, 20% methanol(pH 8.5)
fiber pad, Whatman 3MM filter paper, Nitrocellulose(NC) membrane
wash buffer (Tween-Tris Buffered Saline, TTBS) : 20mM Tris pH 7.6
0.137M NaCl 0.1% Tween 20
Blocking buffer : 1X TTBS, 5%(w/v) skim milk (nonfat dry milk)
Primary antibody
AP-conjugated Secondary antibody
NBT/BCIP
(Nitro-Blue Tetrazolium Chloride/5-Brome-4-Chloro-3`-Indolyphosphate p-Toluidine Salt)


4. Introduction

westen blot은 여러 protein의 mixtures로부터 어떤 특정 protein을 찾아내는 기법으로서 찾고자 하는 protein에 대한 antibody를 사용하여 antigen-antibody reaction을 일으킴으로써 특정 protein의 존재여부를 밝혀낸다. antibody를 사용하기 때문에 immuno blot이라고 하기도 한다. 같은 의미로 사용하지만, immuno blot이 좀 더 포괄적인 의미이다. western blot은 전기영동, transfer를 포함하는 의미이지만 immuno blot은 전기영동이 없는 dot blot까지 모두 포함하기 때문에 넓은 의미라 할 수 있다.

참고 자료

David L. Nelson외(2005), Lehninger Principles Of Biochemistry(4th Ed.), Freeman
www.genscript.com/western_tech.html
ksea.paran.com/sknow/queview.php?que=2589934