Plasmid Purification과 DNA 전기영동

소개글

생화학실험에 대한 결과리포트입니다.
여러 실험하는 사진들과 결과
그리고 결과에 대한 여러가지 추측과 감상들로
이루어져 있습니다.

*Plasmid DNA의 원형을 유지하는 구조적 특징을 이용하여 Alkaline lysis 방법 Plasmid DNA를 떼어 낸다.
* DNA Purification 한 것을 Agarose Gel 전기 영동을 통해 DNA를 크기 별로 분리하여 확인한다.

목차

1.실험제목
2.실험목적
3.시약 및 기구
4.실험결과
5.토론 및 감상

본문내용

① 실험 전날 형질전환 결과, 즉 LB(Amp) plate에서 자라난 colony를 마이크로 피펫으로 1개 따서 e-tube에 담는다. LB(Amp) broth에 접종하여 37℃ Shaking incubator에서 12-16시간 동안 키운다.

*빨간 동그라미 쳐진 곳 안의 하얀색 점 같은 것을 따면 된다.
② overnight culture한 tube를 냉동고에 있는 centrifuge에서 6000rpm으로 5분간 spin-down한 후 상층액(노란색)을 버림.
 P1 200㎕ 첨가 후 피펫팅(혼합)하여 완전히 혼탁한다.
 P2 200㎕ 첨가 후 up & down(invert, 3번 정도)하고 5 min을 기다린다.
 P3 200㎕ 첨가 후 up & down(invert, 3번 정도)하고 4℃ 냉장고에 넣고 15min 기다림. -> Centrifuge( 4℃ 13000rpm 15min)
 sup(상층액)를 조심스레 따서 e-tube로 옮긴 후 Isopropanol 0.7%vol ( 480㎕: 총 용액 600㎕의 80%) 첨가-> centrifuge ( 4℃ 15000rpm 30min )
흰 pellet
 상층액 버리면 흰 pellet 보임
 70% EtOH 500㎕ 정도 첨가하여 DNA - Pellet Washing
 centrifuge ( 4℃ 15000rpm 5min )
 sup 버리고 Dry (1시간)
⑪ 완전 Dry 시킨 후 TE buffer 20㎕ 첨가
Agarose Gel 만들기
⑫ 1% LE Agarose용액 40ml를 준비한다.

->LE Agarose 0.6g + 1xTAE 50ml
(전자레인지에서 증발할 수 있으므로 50ml보다 조금 넘게 넣음)


⑬ 전자레인지에 데워서 녹인다.
매우 뜨거우므로 반드시 장갑을 착용해야 한다.
1분정도 한다. 한번에 1분을 데우면 증발해 버릴 수도 있으므로 (40초,20초,30초)순으로 가열한다.


⑭ EtBr 10㎕첨가. Agarose gel을 식힘(60도)

참고 자료

없음