[자연과학]Western Blot Analysis using His-Tag Antibody

소개글

① SDS-PAGE의 원리를 이용하고 protein을 purification 하는데 이용할 수 있다.
② Bradford method를 이용하여 protein의 농도를 standard curve를 구할 수 있고, 그 curve를 이용해 protein의 농도를 결정 할 수 있다.

목차

1. 실험제목
4. 목적
5.원리
6. 시약 및 기자재
7. 방법
8. 결과
9. 고찰
10.참고문헌

본문내용

SDS-PAGE
Polyacrylamide gel electophoresis에 SDS를 첨가하여 수행하는것을 말한다. Protein은 acrylamide의 구멍 사이를 지나며 마찰력을 받는 데, 입자크기가 크면 마찰이 크기 때문에 느린 속도로 이동하고, 반대로 입자크기가 작으면 빠른 속도로 이동하게 되는데 이러한 원리를 이용하여 Protein을 분리하는 방법이다. 이 경우, gel의 농도가 높을수록, 전압이 낮을수록 Protein의 이동속도는 느려진다.
Western Blot
⑴ Over-view

Immunoblotting이라고도 불린다. 기본 원리는, cell extracts로부터 특정 protein을 detection하기 위해서 먼저 gel electrophoresis를 이용하여 size별로 분리해낸다. 이 과정에서 protein을 순수하게 size별로 분리해 내기 위해서, protein의 단위 질량당 charge와 3차원 folding 구조를 모두 같게 해줘야 한다. 이런 이유로, protein은 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)를 수행한다. 이것은, SDS를 detergent로서 이용하여 protein을 모두 단위 질량당 같은 정도의 negative charge를 띠게 해줘서, 각 protein간의 전하 차이를 제거하며, 동시에 folding 구조를 깨뜨려서 shape 차이로 인한 이동 속도의 변화를 없게 해준다. 따라서 이러한 처리를 가해준 protein은 순수하게 size에 해당하는 정도로 - electrode로부터 + electrode를 향하여 migration하게 된다. 이렇게 protein을 size별로 분리해낸 후에, protein을 membrane으로 transferring 시킨다. 이 과정에서도 역시 protein의 전하 특성을 이용하여, - electrode 쪽에는 gel을, + electrode 쪽에는 membrane을 놓게 된다. 이렇게 하면, size별로 분리된protein이 그대로 membrane으로 이동하게 된다.

참고 자료

킴볼 생화학(John w. Kimvall. 탐구당 1996.)
Recombinant DNA.
실험 생화학 개정 3판, 한국 생화학회(1997)
2006 생화학실험2 후반부 교본