[자연과학]Preparation and Concentration Determination of Plasmid DNA from E.coli

소개글

① E.coli에서 Plasmid DNA를 분리 할수 있다.
② 분리한 Plasmid DNA의 농도를 UV Spectrophotometer를 이용해 알수 있다.

목차

1. 실험제목
4. 목적
5.원리
6. 시약 및 기자재
7. 방법
8. 결과
9. 고찰
10.참고문헌

본문내용

① Plasmid란?
Bacteria 세포 내에 Chromosoma DNA와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할수 있는 DAN 중, 고리모양을 한 유전자이다. 크기가 매우 작은 편인데, 일부는 Plasmid는 conjugation을 통해 다른 bacteria로 옮겨갈수 있다. 이러한 특징 때문에 plasmid는 replication orgin(DNA 복제시작부분), selectable marker(행생물질에 대한 내성을 encode 하는 부분), multiple colning site(restriction enzyme 절단부위)를 지녀야 한다.
② Plasmid 분리하기
일반적으로 Growth of the vacteria culture, Harvesting and lysis of E.coli cells, Purification of the plasmid DNA의 세단계를 거친다. 그 방법으로는 CsCl-Ethidium bromide gradient equilibrium centrifugation(CsCl에 의한 농도차에서 EtBr과 결합한 DNA의 Density 차 이용), Chromatography(resin을 이용해 DNA를 결합 시키는 방법), PEG에 의한 침전법(DNA Purify에 이용), Boiling miniprep(세포막을 열처리 등을 통해 깨뜨린 뒤 원심 분리를 이용), Lithium miniprep(Trion x-100/LiCl을 이용하는 방법) 등이 있다.
③ Alkaline Lysis
Alkaline solution이 선택적으로 chromosomal DNA와 protein만을 denature 시키는데 closed circle DAN의 경우 topologically interwinded 되어 있지 않기 때문에 각 strand는 분리되지 않는다. 이후, neutralization 동안 chromosomal DNA, vacterial protein은 충분이 침전되고, plasmid DAN만 supertnant 상태로 존재하게 되어 분리가 가능하다.
④ 자외선 흡광도에 의한 DAN 농도 측정

참고 자료

Biochemisty FrankB. Armstrong. 1992.
킴볼 생화학(John w. Kimvall. 탐구당 1996.)
생화학 上.1995. Stryer Luvert p48~56. 서울 외국서적
생화학 4/E. Mary K campbell 43~47. 학술정보, 톰슨
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