[자연과학]Restriction Mapping of Circular Plasmid DNA and Transformation of Ligated Plasmid DNA

소개글

- Restriction enzyme을 이용해 DNA mapping과 restriction map을 예측할 수 있다.
- Transformation을 통해 외부유전자를 bacteria에 삽입 할 수 있다.

목차

1. 실험제목
4. 목적
5.원리
6. 시약 및 기자재
7. 방법
8. 결과
9. 고찰
10.참고문헌

본문내용

① Restriction Mapping
DNA segment상에서 제한 효소 절단 부위들의 상대적 위치를 결정하는 과정으로 크게 두 가지 방법을 사용한다. DNA에 여러 종류의 restriction enzyme을 처리한 후 절단된 단편을 이용하여 DNA의 map을 얻는 경우와, DNA의 절편을 end-labeling해 electrophoresis로 분리한 후 partial digestion하는 경우가 있다. 이 경우, restriction mapping은 sub cloning이나 nucleotide 서열 분석에 중요한 역할을 하고, 역으로 restriction map을 예측할 수 있게 한다.
② Agarose gel electrophoresis
Agarose는 D-and L-galactose가 선택적으로 결합한 polymer로 gelation 되어 3차원적으로 직경이 50에서 200정도에 이르는 그물망을 형성하게 된다. 이러한 agarose gel은 주로 상대적으로 큰 DNA 절편(0.5-2.5kb)을 분리하는데 이용된다. DNA가 이러한 gel을 통해 이동하는 것은 DNA의 phosphate group에 의해 주어진 negative charge가 gel 상에 주어진 전기장의 양극 쪽으로 끌림에 의해 가능하다. 이러한 원리는 protein의 electrophoresis와 유사하지만 한 가지 차이점은 핵산의 경우 4조류의 nucleotide가 상대적으로 골고루 분포하고 있으며 분자 내 모든 전하가 phosphodiester group으로부터 유래하기 때문에 전하/질량비(charge to mass ratio)가 분자의 길이에 비례한다는 점이다. 결국 DNA의 migration 속도는 DNA의 molecular weight와 conformation에 의해 결정되는데, DNA는 size가 작으면 작을수록 또한 좀더 compact 하면 할수록 빠른 속도로 gel을 통과해 이동하게 된다.

참고 자료

Biochemisty FrankB. Armstrong. 1992.
킴볼 생화학(John w. Kimvall. 탐구당 1996.)
생화학 上.1995. Stryer Luvert 서울 외국서적
생화학 4/E. Mary K campbell 학술정보, 톰슨
Recombinant DNA chapter 7.
실험 생화학 개정 3판, 한국 생화학회(1997)