[생물실험]전기염동

소개글

열심히 했습니다 ~ ^^
참고하세요 ㅎ

목차

◎실험 목적
◎실험재료
◎실험방법
◎실험 결과
◎실험에 대한 논의
◎보충 조사
◎참고문헌

본문내용

◎실험 목적
1.SDS-PAGE의 원리를 이해한다.
2.SDS-PAGE를 직접 하고 그 실험 결과를 분석해 본다.

◎실험재료
E.coli, 7.5% Polyacrylamide gel (조성은 아래 참고), cenrtifuge, sample buffer (조성은 아래 참고), Size Marker (Invitrogen Mark12 unstained standard), 알콜 램프, 비커, SDS-PAGE running kit, 1X Running buffer 1L

◎실험방법
① E.coli를 centrifuge하여 cell을 다운시킨다.
②supernatant(상층액)를 버리고 pellet(하층에 남은 덩어리)만 남긴후, sample buffer를 30㎕ 넣어준다.
(5x Sample Buffer 조성, 10ml)
0.6ml 1M Tris-HCl(pH6.8) 60mM
5ml 50% glycerol 25%
2ml 10% SDS 2%
0.5ml 2-mercaptoethanol 14.4mM
1ml 1% bromophenol blue 0.1%
0.9ml H2O

③Water bath에서 5분 가량 끓여준다. (알콜램프 이용)
④ vortexing or pipetman으로 pipeting 하여 pellet을 모두 부순다.
⑤10초 정도 centrifuging
⑥ loading (15λ)
( gel 조성 )

A. 7.5% Separating gel (10ml)
Acrylamide/bis(30/0.8) 2.5ml
DW(Distilled water) 4.85ml
1.5M Tris-HCl, pH8.8 2.5ml
10% SDS 0.1ml
10% ammonium ersulfate 50㎕

참고 자료

없음