[미생물 공학]실험. 미생물 배양 및 그램 염색법

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목차

1. 목적
2. 이론
(1) 미생물 배양
(2) 생장곡선 측정
(3) 그람염색(Gram staining)
3. 재료 및 기구
4. 실험 방법
(1) 배지 제조
(2) Growth curve 측정
(3)Agar plate colony counting (평판 계수법)
(4) Gram staining

본문내용

1. 목적
세균을 대량 배양할 때나 또는 조사해야 할 시료의 숫자가 많을 경우에는 배양액의 흡광도를 측정함으로써 세균의 생장을 측정해볼 수 있다. 이번 실험에서는 배양액에서 세균의 생장곡선을 흡광도 측정방법으로 구해보고 또 정확한 균체수의 측정을 위해서 콜로니 계수법을 병행해 보도록 한다.

2. 이론

(1) 미생물 배양
미생물들은 토양, 물, 공기, 음식물이나 동/식물의 표피 등 자연계에 널리 분포한다. 따라서 미생물을 이용한 실험을 위해서는 혼합된 미생물을 단일 콜로니로 분리해야 한다. 다름 종과 혼합되지 않은 단일 종의 미생물을 분리하여 배양하는 것을 순수분리 혹은 순수 배양이라고 한다. 단일 콜로니를 형성하여 순수 분리하는 방법과 분리된 균을 계대하는 방법에는 도말 평판법, 주입 평판법, streakOplate법, 첨자법(sta-inoculation)등 여러 방법들이 있다.
주입 평판법은 고형화 이전의 멸균된 고체배지를 희석 또는 원액의 시료를 일정량 넣어주어 잘 혼합하여 그대로 굳힌 다음 인큐베이터에서 배양하여 형성된 집락수를 세는 방법이며, 도말 평판법은 이미 굳혀진 고체배지위에 희석 또는 원액의 시료를 일정량 멸균된 파이펫으로 뿌린 후 삼각유리막대봉으로 도말 배양하는 방법이다.
고체배지를 만드는 단계에서 영양분이 되는 것과 한천(agar, 배지를 고형화 시키는 물질)을 멸균된 증류수에 넣어주어 습열멸균을 한 후 어느 정도 식힌 후에(물론 이 때는 아직 액체상태) 페트리디쉬에 부어 계속 식히게 되면 서서히 굳어져 간다.
주입평판법은 위 단계의 아직 고체화되지 않은 상태의 배지에 샘플을 넣어 준 후 혼합하는 방법이다. 이때의 온도는 약 50도 정도가 적당하며 온도가 너무 높게 되면 미생물이 증식하지 않을 확률이 높다. 온도에 민감하기 때문에 온도에 신경을 써야한다.
또한 너무 낮은 온도가 되어버리면 고체가 고형화가 되버릴 수 있으므로 주의해야 한다.

참고 자료

없음