[자연과학]PCR

목차

1. Introduction
2. Materials & Methods
3. Results
4. Discussion
5. Review

본문내용

1. Introduction
중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로서, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼
획기적인 것이라고 할 수 있다. 즉 genomic DNA와 같은 아주 큰 DNA로부터 원하는 DNA 부분만을 선택적으로 증폭시킨 후 일반적으로 사용되는 agarose gel이나 polyacrylamide gel 상에서 뚜렷하게 보이는 band로 가시화할 수가 있다.
중합효소 연쇄반응을 통하여 in vitro상에서 특정 부위의 DNA를 105∼108배까지 수시간내에 증폭시킬 수 있으며, 이렇게 증폭된 DNA를 다음과 같이 여러가지 실험에 이용할 수 있고, 실험 결과를 토대로 여러 의학적인 연구에 응용할 수가 있다.
* 중합효소 연쇄반응이 이용되는 실험
1) Probe로 사용할 목적으로 cloning된 이중가닥 DNA의 증폭 2) 적은 양의 mRNA로부터 특정 cDNA의 cloning 3) DNA sequencing 4) 돌연변이 검사 5) 병인성 바이러스 및 박테리아 검출 6) 유전자의 footprinting 7) 특정 부위에 돌연변이를 일으킨 유전자의 제조(site directed mutagenesis)
* 중합효소 연쇄반응의 의학적 응용
1) HLA형의 결정 2) 법의학: 특정인의 유전자 검출 3) 암유전자의 검출: ras, myc, fos 등 4) 유전성 질병의 진단: Progressive muscular dystrophy (Duchenne type)등 5) 감염성 질병의 진단: Streptococcus, Salmonella, Hepatitis virus 등

2. Materials & Methods
1) Materials
- Reagents: Template DNA 1㎕, primer( forward/reverse 각각 1㎕씩),
2 * Taq master mix (Taq polymerase + dNTP + MgCl₂+buffer) 10㎕
3`DDW 7㎕, agarose gel TAE buffer, DW, EtBr 1㎕
- Apparatus: Electrophoresis, PCR machine, micro tube, PCR tube, UV 장치, icropippete, Timer

참고 자료

없음