[자연과학]Western blotting

목차

1. Subject
2. Object
3. Materials & Methods
4. Introduction
5. Results
6. Discussion

본문내용

 Western blotting에서 detection으로 이용되는 방법은 보통 ① antibody를 radioisotope으로 label 시켜서 X-ray film을 이용해서 찾는 방법이 있고, 다음으로 ② antibody를 fluorescent dye로 label 시켜서 형광 색소로 인한 발광을 이용하는 방법이 있으며, 마지막으로는 ③ enzyme을 link 시켜서 이용하는 방법이 있다. 이번 실험에서는 발색반응을 유도하는 enzyme을 이용하게 된다. 우리가 transferring한 protein 중에서 translation시에 나타나는 EF-2(100kD)를 잡아낼 것인데, 1°antibodies를 이용해서 specific binding 시키고 다음에 2°antibodies를 이용해서 1°antibodies를 다시 잡아낸다. 이때, 2차 antibodies는 끝 부분에 enzyme - HRP(Horse radish peroxidase)를 linking 시켜서 detection에 이용한다. HRP 효소는 substrate로서 DAB(diaminobenzidine)을 이용하는데, 효소 반응 결과로 발색 반응을 일으켜서 우리가 육안으로 detection 할 수 있게 해준다. 색깔은 gray나 black으로, membrane상에 band 형으로 나타나게 된다. 또한 효소를 alkaline phosphate를 이용할 경우에는 substrate로서 CN(chloronaphtol)을 이용한다.

참고 자료

없음