Culture of Cancer Line - cell freezing & thawing

소개글

cell freezing & thawing 후 cnacer cell을 culture하는 실험 후 쓴 보고서입니다.

목차

Ⅰ. Principle
1. Cryoprotectant
1) 종류
2) DMSO
2. Freezing & Thawing 시 유의 사항
Ⅱ. Materials and apparatus
Ⅲ. Method
1. Cell의 관찰
2. Freezing
3. Thawing
4. 배지 교환
Ⅳ. Results
Ⅴ. Discussion

본문내용

Ⅰ. Principle
1. Cryoprotectant
1) 종류 : DMSO(Dimethyl sulfoxide), ethylene glycol, glycerol
2) DMSO
구조는 황원자를 중심으로 두개의 메틸기와 한 개의 산소가 결합해 있는 구조이다. 이것은 pH의 변화에 아무런 영향을 주지 않고, 용액의 변성을 막고자 버퍼로 많이 쓰이고 있다. 이것은 양매성인 물질이므로 지용성과 수용성의 용액을 함께 섞고자할 때 탁월한 기능을 보인다. 또한 이것은 극성이 강하므로 물과 잘 혼합해, 물을 반응용매로 하는 유기반응에거 흔히 물과 혼합되어 사용된다.
그 외에도 세포를 냉동 보관할 때 사용되는 freezing solution의 성분이기도하다. 이것은 동결시 얼음 결정이 생기는 것을 방지함으로써 세포가 상처입지 않게 한다. 어는 정도는 독성을 가지므로 10%를 넘지 않게 한다. 이것의 위의 세 용매 중 가장 많이 쓰이는 물질인데, 이것은 다른 용매에는 없는 완충작용도 하기 때문이다.
3) 모든 용매에 공통적으로 적용되는 것은 이것이 얼음결정의 생성을 막거나 약하게 함으로써 cell damage를 줄인다는 것이다.

2. Freezing & Thawing 시 유의 사항
먼저 freezing을 가능하게 하는 기계는 질소 탱크(-196℃)와 Deep freezer 등이 있다. Cell을 cryoprotectant로 처리한 후, 얼릴 때에는 천천히 단계적으로 얼리고, 빠르게 녹이는 것이 cell에 유리하다. 그러므로 cell을 얼릴 때에는 CRF(controlled rate freeaing)을 이용하는데, 이것이 없을 경우에는 우선 -20℃ 정도에서 얼린 후(2시간 정도), 더 낮은 온도(약 -150℃)에서 얼린다. 일반적으로 -120℃ 이하가 되면 그 이하의 온도에서 보관하는 것과 cell에 미치는 영향의 차이는 없다고들 한다.

참고 자료

http://www.dow.com/causticsoda/qual/effects.htm
http://www.biophysj.org/cgi/content/full/74/4/1949