단백질 정량 방법

목차

● Kjeldahl법
1. Kjeldahl법이란?
2. Kjeldahl법 종류
3. Kjeldahl법 시약 및 장치
4. Kjeldahl법 실험절차

● 그 외의 단백질 정량방법
○ UV법 (분광학적 정량법)
○ 뷰렛법
○ Lowry법
○ BCA법
○ Bradford법

본문내용

● Kjeldahl법
1. Kjeldahl법이란?
보통 단백질의 질소함량은 약16%(12~19%)이므로 질소함량을 정량하여 단백질량을 구하는 방법이 고안되어있다. 단백질 함유시료를 진한 황산 중에서 가열분해하면 유기화합물 중의 질소는 암모니아로 되고 황산암모늄으로 반응액 중에 남는다. 분해반응 후 용액을 알칼리성으로 하여 유리하는 암모니아를 수증기와 함께 증류하고 산성용액에 다시 흡수시켜 적정, 비색등의 방법으로 정량한다. 이렇게 하여 얻어진 암모니아량으로부터 시료 중의 단백질량을 계산하는 방법이 Kjeldahl법이다. 시료 중에 단백질 이외의 함질소화합물이 있는 경우나 질소함량이 매우 많거나 적은 단백질의 경우는 오차가 크게 된다. 이 방법은 감도가 좋고 식품과 같은 단백질 혼합물의 단백질함량을 분석하는데 적당하다.

2. Kjeldahl법 종류
식품 중 총 질소량 ： 검체를 분해촉진제인 Hg, HgSO4 또는 HgO와 CuSO4 및 K2SO4의 존재하에서 분해제인 c-H2SO4, 또는 발연황산 혼액과 가열하여 유기물을 완전히 산화분해하는 동시에 질소분을 (NH4）2SO4로 하고 NaOH 알칼리성에서 생성되는 NH3을 일정과량의 H2SO4에 흡수하여 과잉의 H2SO4를 NaOH액으로 역적정하고 NH3에 소비된 H2SO4량에서 NH3량을 구해 질소량을 산출한다.
식품중의 단백질 질소화합물의 총 질소량은 주로 Kjeldahl법으로 측정하는 것이 보편적이다. 이 방법에서는 단백질-N 이외에도 아미노산-N, NH3-N, guanidine-N, purine염기-N, alkaloid-N, 착색료 등의 질소도 총질소량으로 나타나게 된다. 또 이 방법으로 측정되지 않는 것은 NO­3, NO2­, -NO2, -NO, -N=N-, -NH-NH-, -NHNH2, pyridine 등의 질소이다. 이들 질소도 페놀산을 넣어 분해하거나 NO3­, NO2, NO 등을 미리 환원한 후에는 Kjeldahl법으로 측정할 수는 있으나 보통 식품의 질소 정량목적이 단백질의 산출에 있으므로 이와 같은 특별처리는 하지 않는다.

참고 자료

단백질실험노트. 상, 추출 및 분리정제 / 월드사이언스, 2001.
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http://ksea.paran.com/sknow/queview.php?que=354397
http://www.mecasys.co.kr/downloads/Protein_06.pdf
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