Purification of Taq DNA Polymerase

소개글

Taq DNA Polymerase는 온천에서 사는 Thermus aquaticus라는 균주에서 따온 이름이며 열에 대한 저항성이 강하기 때문에 PCR 에서 DNA를 증폭할 때 중요한 역할을 한다. 이 실험에서 Taq DNA Polymerase를 삽입한 plasmid를 E.coli BL21(DE3) cell에 transformaion하고 IPTG를 이용하여 발현시킨 후 salt out과 dialysis 방법으로 purification 한 후 SDS-PAGE로 발현을 확인하였다. Taq DNA Polymerase가 잘 정제되었는지 확인하기위해 Taq DNA Polymerase를 이용하여 PCR을 한 후 DNA를 증폭하여 Agarose gel electrophoresis을 하였다.

목차

INTRODUCTION
MATERIALS AND METHODS
1. transformation of frozen competent cell
2. transformed cell 배양
3. Bradford Assay
4. Cell lysis
5. Salt out and Dialysis
RESULT
DISCUSSION
REFERENCES

본문내용

Taq DNA Polymerase는 온천에서 사는 Thermus aquaticus라는 균주에서 따온 이름이며 열에 대한 저항성이 강하기 때문에 PCR 에서 DNA를 증폭할 때 중요한 역할을 한다. 이 실험에서 Taq DNA Polymerase를 삽입한 plasmid를 E.coli BL21(DE3) cell에 transformaion하고 IPTG를 이용하여 발현시킨 후 salt out과 dialysis 방법으로 purification 한 후 SDS-PAGE로 발현을 확인하였다. Taq DNA Polymerase가 잘 정제되었는지 확인하기위해 Taq DNA Polymerase를 이용하여 PCR을 한 후 DNA를 증폭하여 Agarose gel electrophoresis을 하였다.

INTRODUCTION

PCR(polymer chain reaction)은 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. DNA molecule의 어느 부분이든지 그 border sequence만 알면 이 방법을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 기본적으로 denaturation, annealing extension 이렇게 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭시켜 gel electrophoresis로 분석할 수 있게 된다. 기본적으로 PCR을 구성하고 있는 요소들에는 DNA template, primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다. Denaturation은 DNA의 Polymerase의 DNA를 두 가닥으로 가르기 위해 온도를 90°C로 가열해 DNA의 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어지게 해 double strand DNA를 single strand DNA로 분리시킬 수 있다. 높은 온도일수록 ssDNA로 잘 분리되지만 기능이 파괴되는데 Taq DNA polymerase는 열에 대한 저항성이 강하기 때문에 각 단계마다 새로운 polymerase를 넣어주지 않아도 된다.(1,2) Purification하기 위해 Taq DNA polymerase를 primer와 DNA template와 함께 시험관에 넣어주고 thermal cycle에 넣어주면 반응이 진행된다.

참고 자료

(1) T.A. Brown ,Gene cloning, p.179-193
(2) Molecular Biology by Robert.F Weaver ISBN 0-697-14750-9
(3) Kim, Y. C., Kwon, S., Lee, S. Y. and Chang, H. N., "Effect of pLysS on the production of bioadhesive precursor protein by fed-batch cultivation of recombinant Eshcherichia coli" Biotechnol. Lett., 20(8):799-803 (1998)
(4)http//kin.naver.com/db/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=L1iTeGScYJGEXlq4iOf1zZQOze4l0QLz&qb=SVBURw==
(5) 2004 Microbial genetics Dept. of Microbiol.