제한효소 처리 및 Agarose gel 전기영동

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제한효소 처리 및 Agarose gel 전기영동

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1. 주제 : 제한효소 처리 및 Agarose gel 전기영동
2. 실험재료 :
① 기구 : 튜브(小 1.5mL), 마이크로미터, 원심분리기, 자외선램프, 균배양기
전기영동 Kit (agarose gel mold, comb, gel electrophoresis tank)
: 원래 16 well이 있는데, 우리가 실험에 사용한 것은 12well이었다.
그 자체는 paraffin(초의 원료로 물을 흡수하지 않음)으로 만들어 졌다.
② 한 tube에 들어가는 것 : (순서대로)
1) Distilled Water 7mL
2) 10X buffer 2μL
3) enzyme 1μL: 사실, 효소의 활성화방지를 위해서 얼음을 사용하는데,
이때 , 글리세롤을 함께 넣어주게 되면 글리세롤이 어는점을 낮춰줘서 천천히 얼게 되므로 세균의 파괴를 막아준다.
(1,2,3후 잠깐 원심분리를 거치고 나서)
4) PCR 10μL를 넣는다.
③ 전기영동 시 젤 안에 들어가는 것
1) Agarose : Agar에서 좀더 정제된 것. DNA size가 클수록 사용.
RNA, DNA, total DNA를 보통 분리
2) buffer 2μL : 전기가 흘러야 하므로 넣어준다.
3) EtBr (Ethidium bromide) :
-UV를 쪼였을때 나타나라고 넣어주는 것. 발암물질이므로 주의해야 한다.
-나중에 UV로 관찰하면, 염기와 염기 사이에 형광물질이 나타나는데, 이 게 바로 EtBr이다. 그래서 손으로 만지면 안됨.
④ 전기영동 시 조그만 홈 안에 넣어야 할 것들
1) enzyme-product Loading 10μL+Loading Dye 1μL(본 실험)
2) PCR product (대조: 제한효소에 의해 잘리지 않은 것) 5μL+Dye 1μL
3) 1Kb DNA Ladder 3μL Loading(size 비교)
⑤ 염색약 : Phenol blue (DNA의 색깔이 투명하여 보이지 않으므로 첨가)

참고 자료

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