[유전학]웨스턴 블롯팅

소개글

웨스턴 블롯팅에 대한 실험 및 조사 자료

목차

1. 원리
2. 방법
3. 용도
4. 참고 사항
5. 실험절차
6. 사용증례

본문내용

1. 원리

웨스턴 블로팅은(특별한 항원을 찾기 위해 항체를 이용하기 때문에immunoblotting이라고 불리기도 한다) 이 방법은 Stanford의 George Stark 연구소에서 유리되었으며 Towbin, et al.에 의해 1979년에 소개되었다. 그리고 지금은 단백질 분석 기술의 상례가 되고 있다. 웨스턴 블로팅은 항원-항체 반응을 이용하여 많은 단백질 혼합물 중에서 특정 단백질을 구별해 낼 수 있다는 것이다.
웨스턴 블로팅에서 탐침은 방사성 올리고뉴클레오티드 탐침자를 사용하는 대신 특정 단백질의 항체를 탐침자로 이용한다. 첫 번째 항체에 특이적이고 보통 형광물질로 표지된 두 번째 항체가 첫 번째 항체를 찾아내게 된다. 예를 들어 클론에 있는 특정 단백질을 찾는다고 가정하자. 클론은 니트로셀룰로스 필터에 옮겨진 후 용해된다. 그런 다음 특정 단백질의 항체를 처리한다. 첫 번째 항체에 특이적이고 형광물질로 표지된 두 번째 항체를 필터에 처리한다. 두 번째 항체의 형광이 첫 번째 항체의 위치를 알려주게 되며, 따라서 특정 단백질을 발현시키는 유전자를 찾을 수 있는 것이다.

2. 방법

여러 가지 단백들을 함유하고 있는 혼합액(일반적으로 세포 추출물이나 혈청)을 sodium dodecylsulfate(SDS)가 포함되어 있는 폴리아크릴아마이드겔에서 전기영동하여 단백들을 크기에 따라 분리하여 나열시킨다. 폴리아크릴아마이드 겔에 nitrocellulose 또는 nylon 흡착지를 rurqcu 놓고 전기를 걸어 겔 속에 있던 단백들을 흡착지로 이동시킨다. 흡착지를 보합결합 주머니(hybridization bag)에 넣고 어떤 단백의 항체(1차 항체, primary antibody)를 포함한 보합결합 용액(hybridization solution)과 함께 배양한 후, 다시 그 항체에 대한 항체(2차 항체, secondary antibody)와 반응시킨다.

참고 자료

고려의학 <분자의학 연구기법> 양인명, 최영길 편저
MC Graw Hill <유전학의 이해>