노던 블롯팅(Northern blotting)

소개글

노던 블롯팅에 관한 조사

목차

1.원리
2.용도
3.방법
4.참고사항
5.실험절차
6.사용증례
7.참고문헌

본문내용

노던 블롯팅 Northern Blotting

Ⅰ. 원리

일반적으로 동물세포에는 약 100pg 정도의 RNA가 들어 있다. 이 중 80~85%는 라이보좀 RNA(rRNA, 주로 28S, 18S, 5S)가 차지하고 있다. 나머지의 대부분은 운반 RNA(tRNA)나 이질성 핵 RNA로 되어 있다. 이러한 RNA는 크기와 핵산 서열이 밝혀져 있으며 여러 가지 방법(전기영동, 농도구배 원심분리, 음이온 교환 색층분리, 고압액체 색층분리) 으로 순수하게 분리할 수 있다.
반면에 전령 RNA(mRNA)는 전체 RNA의 1~5%(1~5pg) 정도만 차지하며 크기나 핵산 서열이 매우 다양하다. 그러나 대부분의 유핵 세포 전령 RNA는 3‘ 말단에 아데닌이 많이 부착되어 있어 oligo(dT)-cellulose를 이용한 친화성 색층분석으로 순수하게 전령 RNA만 분리할 수 있다.
전령 RNA를 분리하는 목적은 대개 두 가지이다. 첫째는 유전자 발현의 유무 및 그 정도를 분석하기 위함이고, 둘째는 유전자의 조절 특성을 규명을 위하여 유전자에서 ks들어진 전령 RNA의 구조와 양을 알고자 함이다.
써던 블롯팅이 DNA를 다루는 작업인 반면에 노던 블롯팅은 RNA를 다루는 기술이다. 노던 블롯팅은 우선 원하는 세포나 조직에서 RNA를 추출해서 RNA의 크기별로 한천 겔에서 전기영동을 통하여 분리하게 된다. 이것을 다루기 쉬운 nitrocellulose 흡착지나 nylon 흡착지에 옮긴 후 원하는 전령 RNA의 상보적인 DNA나 RNA 소식자를 흡착지 위의 전령 RNA와 보합결합시킨 후 자가방사기록함으로써 원하는 전령 RNA의 크기와 상대적인 양을 측정하는 것이다.

참고 자료

고려의학 <분자의학 연구기법> 양인명, 최영길 편저