[유전학실험]PCR과 DNA fingerprinting

소개글

PCR과 DNA fingerprinting 에 대한 실험레포트입니다.
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목차

1. 주제
2. 날짜
3. 소속
4. 조원
5. 서론
6. 실험 기구 및 재료
7. 실험방법
8. 결과 및 고찰

본문내용

1) PCR(polymerase chain reaction) : 중합효소 연쇄반응
(1) PCR(polymer chain reaction)은 DNA 지문에서 가장 일반적으로 사용하는 기술로 DNA의 원하는 부분을 증폭하는 방법이다. 다시 말해 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA합성이 가능하므로 분자 생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다. 즉 DNA molecule의 어느 부분이든지 그 border sequence만 알면 이 방법을 통해서 증폭할 수 있다. PCR은 기본적으로 DNA의 변성 (denaturation) - 90~96℃로 가열하여 double strand DNA (ds DNA)를 single strand DNA (ssDNA)로 분리 시킨다. 높은 온도일수록 ssDNA로 잘 이행되지만 Taq DNA polymerase도 온도가 아주 높은 상태에서는 활성도가 낮아질 수 있으므로 보통 94℃로 쓴다. Cycle의 처음은 확실한 변성을 위하여 약 5분간 시간을 주어야 한다-, Primer의 결합 (annealing) -50~65℃에서 진행되며, 염기간에 G와 C는 세군데에서 수소결합이 일어나고, A와 T는 두군데에서 결합이 일어나므로 G + C 비율에 따라 결합온도에 변화를 주어야 한다-, DNA의 합성 (polymerization) - 70~74℃에서 시행하며 원하는 PCR 산물의 크기가 크거나 반응요소의 농도가 낮을 때에는 시간을 연장시키는 것이 좋다. Taq DNA polymerase는 보통 1분에 2000~4000 nucleotides를 합성할 수 있으므로 원하는 PCR 산물의 크기 1kb마다 1분 정도의 시간을 배당하면 충분히 반응이 일어날 수 있다. Cycle이 계속되면서 효소 활성이 감소할 수 있고 DNA산물은 점점 많이 존재하게 되므로 Cycle이 계속되면서 효소 활성이 감소할 수 있고 DNA 산물은 점점 많이 존재하게 되므로 cycle후반부에는 반응시간을 조금씩 늘려가는 것도 좋은 방법의 하나이며ㅡ 마지막 cycle에는 시간을 충분히(10분) 주어 효소의 활성이 충분히 발휘되도록 한다.-의 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다. 기본적으로 PCR을 구성하고 있는 요소들에는 DNA template, primer, dNTP, polymerase등이 있으며, PCR 과정에서 그것의 sensitivity와 accuracy에 가장 영향을 미치는 것은 primer와 temperature이다.

참고 자료

biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/PCR.php
bvio.ngic.re.kr/Bvio/index.php?title=RAPD
khmc.or.kr/%7Eyoungkmc/particle/ch44_5.htm
DNA 타이핑 / 정연보 / 인제대학교출판부 / 1996
Blackwell Publishing [http://www.blackwellpublishing.com]
Kimball`s Biology Pages [http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/]
Computational Biology & Bioinformatics Lab. [http://bio.gsnu.ac.kr]
(주) 아이디진 [http://idgene.co.kr/]