[화학공학]DNA의 ligation

목차

ligation
1. 실험목적
2. Ligation 이란?
3. 재료 및 방법

Digestion
1. 실험목적
2. 재료 및 방법

본문내용

# sticky 말단이 ligation 효율을 증가시킨다.

blunt 말단이 결합하는 것을 효율적이지 못한데 왜냐하면 ligase는 ligation 되는 분자를 ‘붙잡아’ 둘 수 없어서 양끝이 우연히 만나도록 기다려야 하기 때문이다. 양끝이 올바르게 만날 기회를 증가시키기 위해서 고농도 DNA를 사용하여 blunt 말단 ligation 시켜야 한다.
그러나 sticky 말단은 효소가 작용할 수 있도록 비교적 안정한 구조를 형성하는 수소 결합에 의해 상보적인 sticky 말단이 염기쌍을 이룰 수 있기 때문에 훨씬 효과적인 ligation을 할 수 있다. 이러한 일시적인 염기쌍 구조가 두 말단이 서로 접촉할 시간을 늘여 줌으로 ligation의 효력을 증가시킨다.
∴ligation 되기 위해 상보 sticky 말단이 바람직한데 일반적으로 벡터분자가 sticky 말단을 가지지만 클로닝 되는 DNA 단편은 blunt이다. DNA단편에 올바른 sticky 말단을 붙이기 위해서 linker, adapter, homopolymer tailing에 의한 접착말단의 도입을 이용한다.

즉, Digation은...
EcoRⅠ으로 insert를 포함하는 부위를 자르고 insert의 크기와 포함된 나머지 염기서열들의 크기를 전기영동 등을 통해 확인함으로서 insert DNA를 확인할 수 있다.

참고 자료

없음