[생명공학]HCV induces ER stress and manipulates UPR
- 최초 등록일
- 2006.05.19
- 최종 저작일
- 1997.01
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소개글
HCV induces ER stress and manipulates UPR에 관한 졸업 논문 입니다.
목차
서 론
HCV life cycle
HCV genome의 역할
1. Massenger RNA로써 viral
protein의 translation
2. Template 로써 RNA
replication.
3. New virus particle에 packaging.
연 구 계 획 1
연 구 계 획 2
본 론
1. XBP1 mRNA splicing
3. Un/spliced XBP1 mRNA 분석
4. XBP1(S) trans-activating activity
5. EDEM transcription
본문내용
본 론
1. XBP1 mRNA splicing
두개의 ORFs, 26bp intron, bZIP domain
ER stress의한 response에 의해 splicing frame shift
376aa XBPI(S)는 transcriptional activator
2. XBP1(S) expression
Human hepatoma cell line :
Huh7, FCA4, GS4.3
HCV subgenomic replicon을 stably expressing
Huh7, FCA4, GS4.3 cells에서 XBP1(S)의 발현양을 비교
Western blot
HCV replicon이 발현되는 cell에서 XBP1(S)가 induction
XBP1(U)는 cell 안에서 빠르게 degradation되기 때문에 proteasom inhibtor(MG132)를 처리했다.
3. Un/spliced XBP1 mRNA 분석
RT-PCR을 이용하여 Huh7, FCA4, GS4.3 cell에서 unspliced/spliced XBP1 mRNA의 존재 여부 확인
Primer는 intron에 bordering하고 ORF의 overlapping부분을 이용
FCA4, GS4.3 cell에서 416bp(f)가 발견 되었으나 Huh7 cell에는 거의 발견되지 않았다.
Tm을 처리한 Huh7 cell에서 유사한 band 발견.
따라서 HCV replicon을 carrying하는
cell은 XBP1 mRNA를 splicing시킨다.
XBP1(S)의 발현을 증가시킨다.
4. XBP1(S) trans-activating activity
UPRE sequence는 XBP1(S)의 binding site motif를 포함.
XBP1(S)는 UPRE를 통한 transcriptional induction을 한다.
Five consecutive UPRE를 transcriptional control로 하는 luciferase reporter plasmid사용
FCA4, GS4.3 cell이 Huh7 cell보다 4배정도 낮게 나타남.
HCV replicon이 expressing되는 cell에서는 XBP1(S) activity가 제한 받는다고 사료됨.
IRE1-XBP1 pathway를 suppresion
참고 자료
없음