[생물]단백질 추출과 전기영동

소개글

생물학실험보고서입니다.
title은 단백질 추출과 전기영동이고,
보고서 외에 과제 첨부되어있습니다.

목차

title 단백질 추출과 전기영동
method
result
discussion
reference
조직마다 다른 전기영동 결과

과제
1.(1)Acrylamide화학구조와 polymerization반응
(2) (2) stacking gel과 separating gel만들 때 각각 들어가는 물질의 역할?
2. 전기영동 시에 separation되는 원리
3. Commassie외의 다른 staining방법
4. Bradford 단백질 정량 방법

본문내용

1.(1) Acrylamide화학구조와 polymerization반응
Acrylamide를 가교제 (cross-linker)로 중합한 polyacrylamide gel은 acrylamide와 가교 제의 농도 및 비율에 의해 gel내 미세통로의 크기를 조절할 수 있어 다양한 크기의 생체 분 자들을 분리할 수 있을 뿐만 아니라 높은 정밀도와 고분해능으로 인해 오래 전부터 단백질, 핵산 등의 분리에 널리 사용돼 왔다.
Polyacrylamide gel은 acrylamide 측쇄 기능기가 N,N`-methylene bisacrylamide와 같은 2개의 기능기를 가지는 화합물에 의해 비가역적으로 중합되어 형성된 polymer이다 (그림1).

가교제로는 N,N`-methylene bisacrylamide이 (일반적으로 bisacrylamide라 한다) 많이 사 용되고 있으며, 또는 N,N`-bisacrylylcystamine (BAC), N,N`-diallyltartardiamine (DATD), Ethylene diacrylate (EDIA) 등도 특수한 목적으로 사용되기도 한다.

생체물질의 효과적인 분리 범위는 polyacrylamide의 농도와 가교제와의 중합 정도에 의해 결 정되며 가교제에 의해 중합되어 생긴 gel은 적절한 강도와 탄성을 유지하고 polypeptide가 통과할 작은 구멍을 형성한다. 이 구멍의 크기는 가교제와 polyacrylamide의 비율이 증가할 수록 감소하여 약 1:20 정도에서 가장 작게 된다. 대부분의 polyacrylamide gel은 1:29의 몰 비율로 제조하며 사용하고 있으며 이 비에서 분자량이 3% 정도의 차이가 있는 polypeptide 를 분리할 수 있다.

Polyacrylamide gel은 %T와 %C로 표현되는데 %T는 acrylamide와 bisacrylamide의 %중 량이며 %C는 가교제인 bisacrylamide의 %중량이다. 따라서 %T와 %C가 커지면 그만큼 미 세통로의 크기는 작아지게 되어 작은 물질의 분리에 이용할 수 있게 된다.

참고 자료

없음