[생물학, 유전학실험]PCR & Genomic fingerprinting

소개글

자료정리과 참고 그림정리가 잘 되어 있으며
실험과정및 결과도 잘 되어 있음

목차

Ⅰ. Title
Ⅱ. Introduction
⒈ PCR의 원리
⒉ PCR의 과정
Ⅲ. Material & method
Ⅵ. Result & discussion
Ⅶ. Reference

본문내용

Ⅰ. Title
" 중합효소 연쇄반응 ( PCR :Polymerase chain reaction )
& Genomic fingerprinting "
삼육대학교 생명과학과 / 유전학 실험 3조
백 은혜, 이 정희, 홍 영주

Ⅱ. Introduction
유전자 공학의 초기에서부터 생체 내에서 유전자의 copy수를 증폭하는 것이 재조합 DNA를 얻는 일반적 방법이었다. 그러나 최근에는 시험관 내에서 내열성 DNA polymerase를 사용하여 임의의 DNA 단편을 간편하게 증폭하는 방법으로 PCR이 개발되어 널리 사용되고 있다.
⒈ PCR의 원리
PCR(polymerase chain reaction)은 시험관 내에서 DNA에 polymerase를 작용시티는 것으로써 연쇄적 반응으로 DNA량을 증폭시키는 방법이다. 원하는 DNA의 양 말단 부근의 염기서열을 아는 경우에는 각 DNA 가닥의 3‘말단 부근의 염기에 상보적인 수십 염기의 nucleotide를 합성하여 이것을 primer로 사용한다. primer와 4종의 deoxyribonucleotide를 충분히 가하고 Thermus aquaticus와 같은 호열균 유래의 DNA polymerase를 가해 반복하여 반응을 진행한다. PCR은 기본적으로 denaturation, annealing, extension의 세 단계로 구성되어 있고, 이 과정이 반복되면서 DNA가 증폭된다.
⒉ PCR의 과정
반응의 cycle은 먼저 94℃에서 1분 동안 처리하여 DNA를 단일가닥으로 변성시키고 계속해서 50℃, 30초 처리로 단일가닥 DNA와 primer를 annealing시키며, 끝으로 74℃에서 2분간 반응시켜 상보가닥을 합성하는 과정을 반복하는 것이다.
⑴ Denaturation
PCR의 가장 첫 단계이며, 온도가 높아짐에 따라 DNA의 염기 사이에 있는 수소결합이 끊어져 두 가닥의 DNA가 분리된다. 일반적으로 94℃ 정도에서 1분간 진행된다.
⑵ Annealing
각각 두 가닥으로 분리된 DNA molecule에 primer가 붙는 과정이다. Primer는 그들과 상보적인 염기를 가지고 있는 DNA 서열에 달라붙는다. 이 과정이 바로 PCR의 accuracy를 결정짓는 단계이며, 어느 온도로 진행되는 가는 primer의 길이와 그것을 이루고 있는 염기의 종류에 따라 달라진다. 만약에 온도가 너무 높으면 primer가 DNA molecule에 잘 달라붙지 않아 그 효율이 떨어지며, 반대로 온도가 너무 낮을 경우에는 primer가 mismatch할 확률이 높아서 정확도가 그만큼 더 떨어진다.
⑶ Extension
Primer로부터 DNA가 뻗어나가는 과정이다. 물론 template와 상보적 결합으로 인하여 뻗어나간다. 이때는 보통 74℃에서 2분간 진행되며, 이 온도가 Taq polymerase의 활성이 최대로 되는 온도이다.

참고 자료

• 현대 분자생물학[유전자] / 권무식 외 / 드림미디어
Part4. Static Nature of Genes : PCR의 원리 - p.114
• Microbiology / PRESCOTT / McGRAW HILL
Ch14. Recombinant DNA Technology :
• www. biochemistry. yonsei. ac. kr