[생명과학]TRANSFORMATION

소개글

TRANSFORMATION 및 접종,Medium prep,Mini prep등 구체적인 내용과 원리설명

목차

1.TRANSFORMATION
2.접종
3.Medium prep
4.Mini prep
5.원리설명

본문내용

TRANSFORMATION---MIC-1
1. competent cell 20 μl 을 e-tube에 옮긴 후 plasmid DNA 1 μl 을 넣어준다.
2. ice에 30 분 둔다.
3. 42℃에서 heat shock 을 1분 주고 ice 에 옮겨 3분을 기다린다.
4. LB- 300 μl 을 넣고 37℃ water bath에 1hr 둔다.
5. 배양액 100 μl 을 LB+ ampicillin plate에 spreading 하여 37℃에서 overnight 을 한다.

Super coil plasmid DNA 일 경우
competent cell 20 μl 을 e-tube에 옮긴 후 plasmid DNA 1 μl 을 넣어준다.
42℃에서 heat shock 을 1분 주고 ice 에 옮겨 3분을 기다린다.
LB- 300 μl 을 넣고 37℃ water bath에 10min 둔다.
배양액 100 μl 을 LB+ ampicillin plate에 spreading 하여 37℃에서 overnight 한다.

접종
6. 250 ml 삼각 플라스크에 100 ml씩 LB+ ampicillin를 넣어준다.
7. plate에서 cell colony 을 따서 삼각 플라스크에 넣는다. In incubator
8. shaking incubation에서 overnight 하여 준다.

Medium prep
9. P1 solution 30ml 에 Rnase 300 μl 을 넣어준다. (1ml에 100 μl)
10. cell tube에 P1을 2ml씩 넣는다.
11. vortexting 을 하여 cell을 완전히 풀어 준다. -한곳에 모아 4ml을 만든다.
12. cell tube에 P2을 4ml씩 넣고 gently 하게 섞어 주거나 inverting을 4~6번 한다.
13. 5min 동안 RT 에서 기다린다.
14. cell tube에 P3을 4ml 넣고 조금 세게 gently 하게 흔들어준다.
15. ice 에서 15min 동안 incubation 하여 준다.
16. centrifuge을 3000rpm 에서 10min 하여 준다.
거름 종이로 깔 대기를 만든다.
Coolum box에 column 을 꽂는다.
Column을 재 사용시 washing을 하여 준다.
-column에 QF을 5ml 정도 부어준다. -이전의 DNA 제거
-QBF를 약 5ml 넣어서 내린다.
-QF를 약 5ml 넣는다.

참고 자료

실제 실험 경험