[생화학실험]박테리아의 형질전환

소개글

박테리아의 형질전환에 대한 실험보고서 입니다.
대장균을 사용하여 실험하였으며 암피실린의 저항성 여부로 colony의 형성을 관찰하는 결과까지 포함되어있습니다.

목차

1.실험제목
2.실험목적
3.이론
(1)플라스미드/벡터
(2)클로닝
(3)박테리아의 형질전환
(4)플라스미드를 이용한 인공적 형질전환
(5)대장균/콜로니
4.실험방법
5.실험결과 및 고찰
고찰내용
(1)반응능 대장균 세포의 제법(CaCl2이용)
(2)형질전환된 세포의 선택
(3)그 밖의 형질 전환 방법
(4)LB배지 만들기

본문내용

Ⅰ. 실험제목 : 박테리아의 형질전환

Ⅱ. 실험목적
박테리아의 유전형질을 플라스미드(plasmid)를 이용한 유전자 도입방법으로 전환 시키고 형질 전환된 박테리아를 선택하는 과정 등을 이해한다. 실제로 형질 전환이 되었는지 살펴본다.

Ⅲ. 이론
(1) 플라스미드(plasmid)/ 벡터(vector)
세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA의 고리 모양인 유전자이다. 플라스미드에는 약제에 대한 저항성을 가진 내성인자(R인자), 세균의 자웅을 결정하는 성결정인자(F인자) 등이 발견되고 있다. 세균의 생존에 플라스미드의 존재가 필수적인 것이 아니며, 또 플라스미드는 다른 종의 세포 내에도 전달된다.
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(4) 플라스미드를 이용한 인공적인 형질전환
박테리아의 세 과정-형질전환, 형질도입, 접합-은 자연 상태에서 발생하지만 본 실험에서는 인공적인 조건에서의 형질전환을 유도한다. 이를 위해서는 외부의 DNA를 받아들일 수 있도록 박테리아의 세포막을 화학적으로 변화시켜야 한다. 가장 널리 사용되는 방법이 polyethyleneglycol(PEG) 처리하는 것이다. 이렇게 처리된 박테리아를 ‘competent cell`이라 한다. competent cell에 DNA를 섞어주고 고농도의 2가 양이온(CaCl2)과 온도 쇼크(heat shock)를 주면 DNA가 competent cell 내부로 들어간다. 이렇게 형질전환된 박테리아를 형질전환되지 않은 박테리아와 선별하기 위해 외부의 DNA에 ’selectable marker` 유전자인 암피실린 저항 유전자(ampicillin resistance gene)를 이용한다. 즉, 형질전환된 박테리아는 항생제인 암피실린(ampicillin)에 대해 저항성을 가져 암피실린이 들어있는 배지에서 자라지만 형질 전환이 안 된 박테리아는 암피실린 배지에서 자라지 못한다.
(참고) competent cell
E.coli를 포함한 대부분의 bacteria는 일반적인 환경에서 극히 제한된 양의 DNA만을 받아 들인다...........

참고 자료

생물학실험서(라이프사이언스)
네이버 백과사전
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/