[유전학]Real time PCR에 대하여

소개글

PCR(Polymerase Chain Reaction;중합효소연쇄반응)은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관 내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하기 때문에 분자생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다.

목차

Ⅰ. PCR의 개요
1. PCR의 원리
2. PCR을 이용한 분자생물학 기초 연구
3. PCR의 한계
Ⅱ. PCR 기술의 진보 - “Real Time PCR”
1. Real-time PCR의 개요 및 그 효과
2. 세 가지 probe based system
3. Real time PCR의 이점
Ⅲ. PCR 기술의 전망

본문내용

Ⅰ. PCR의 개요

PCR(Polymerase Chain Reaction;중합효소연쇄반응)은 DNA의 이중가닥을 주형(template)으로 하여 동시에 primer annealing site의 특정 염기서열을 증폭하는 방법으로, 1983년 K. Mullus에 의해 고안되었다. 초기에는 DNA polymerase로서 Klenow fragment를 이용했으나, 이 효소는 열에 매우 약하기 때문에 매 cycle마다 새로 효소를 첨가해야 하는 문제점이 있었다. 그러나 1988년 SAIKI 등에 의해 고온균인 Thermus aquaticus YT-1 균주로부터 내열성 Taq DNA polymerase가 개발됨으로써(Fig. 1), PCR은 현대 분자생물학 연구에서 가장 중요한 핵심기술이 되었다. 다시 말해서, PCR은 특정 DNA 부위를 특이적으로 반복 합성하여 시험관 내에서 원하는 DNA 분자를 증폭시키는 방법으로, 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하기 때문에 분자생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있다

1. PCR의 원리

PCR에는 4가지의 deoxyribonucleotide(dNTP), 2가지의 primers, DNA polymerase, template DNA, 그리고 Mg2+이 들어있는 반응 완충액이 필요하다. PCR은 이들 반응 혼합물을 이용한 DNA polymerase의 DNA 중합활성을 이용하여 수행한다. 즉, DNA polymerase가 단일가닥 DNA를 주형으로 하고 결합된 primer에 dNTP를 이용하여 상보적인 DNA를 합성한다. 우선 94℃에서 주형 DNA를 단일가닥으로 변성시킨(denature) 다음, 온도를 낮추어 주형 DNA와 primer들 간에 결합(annealing)이 일어나게 한다. Annealing 온도는 55℃ 정도가 일반적이다. 다음에는 내열성 Taq DNA polymerase의 최적 활성 온도인 72℃에서 dNTP를 이용하여 DNA 합성이 일어나게 한다. 이렇게 하여 PCR은 주형의 변성(denaturation), primer의 결합(annealing), DNA 가닥의 합성(extension)이 한 cycle이 된다
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참고 자료

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