[유전공학] 자기 DNA추출

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본문내용

실험은 핵과 DNA가 없는 적혈구층은 사용하지 않고 백혈구층은 buffer 처리 하여 그것을 가지고 실험했다. (조교 준비) → 50㎕
처음 우리가 한 실험 과정은 위 실험과정 중 여섯 번째 과정에 해당하는 것으로 상등액을 new e-tube에 transfer하는 것이었다. 180㎕씩 두 번 했다. 이 과정에서 transfer할 때 실같은 물질이 따라 올라오는 것을 볼 수 있었는데, 그것이 단백질과 지방층이라고 한다. 그것들이 transfer과정에서 제거가 안되면 깨끗한 DNA를 얻지 못한다고 한다. 그래서 이 실험은 주의해서 했다.
다음에는 360㎕의 phenol/chloroform/isoamylalcohol을 섞어 inverting 했다. DNA가 깨지는 것을 방지하기 위해서였다. 조심해서 inverting 해주지 않으면 DNA가 조각나서 전기영동 시 밴드가 관찰되지 않을 수도 있다고 한다. 그리고 위의 phenol/chloroform/isoamylalcoho를 섞는 이유는 혈액에 있는 단백질과 지방을 변형시켜 제거시키기 위함이었다.
다음에는 centrifuge 10분 후 상등액 200㎕를 new e-tube에 transfer 했다. 그리고 동량(200㎕)의 chloroform/isoamylalcohol을 섞고 inverting 후 centrifuge 10분 했다. 다시 상등액 120㎕를 new e-tube에 transfer하고 상등액의 세배인 360㎕의 ethanol을 넣었다. Ethanol을 넣는 이유는 DNA를 안정화시키기 위해서였다. Inverting 후 실타래 같은 작은 DNA가 눈에 보였다. DNA를 눈으로 볼 수 있어서 정말 신기했다.
DNA추출이 깨끗하게 되지 못했다. DNA 전기영동 사진에서 우리 조는 밴드가 거의 안나타나고 지저분하게 보인다. purity값은 1.8에서 2.0사이로 잘 나온 것 같은데 전기영동 사진이 잘 안나온 것 같아 이상하다.

참고 자료

http://www.sesri.re.kr/multimidia/hgh/2000/4/Other/root/생물/혈%20액.htm
http://www.ims.hs.kr/cyber/class/2002-2-1-13/blood.htm
「유전공학」Watson, James D 탐구당, p87-p101 ← pre report