[생물학 실험] Transformation

소개글

실험중 이해가 가지 않는 부분이 있어 분석이 조금 어려웠습니다.
그러나!! A맞았습니다. ^-^;;

목차

1. Introduction
2. Materials
3. Data & Result
4. Discussion

본문내용

1. Introduction

● Ligation의 개념
Ligation은 문자 그대로 DNA나 RNA의 끝을 이어주는 과정을 가리키는 용어이다. 이 반응에 이용되는 효소를 ligase라 하며 DNA를 기질로 사용하는 ligase를 DNA ligase, RNA를 기질로 사용하는 ligase를 RNA ligase라 한다.
유전자 재조합 과정에 사용되는 ligase는 주로 DNA ligase이며, 이 효소는 원핵세포, 진핵세포, 바이러스 등에서 유래한 것이 있는데, 현재 많이 사용되는 ligase는 T4 DNA ligase와 E. coli DNA ligase이다. T4 DNA ligase는 cofactor로 ATP를 필요로 하고, E. coli ligase는 NAD+를 필요로 한다. 이 두 ligase는 blunt-ended DNA, cohesive-ended DNA, nicked DNA 등에 모두 작용할 수 있으나 E. coli DNA ligase는 T4 DNA ligase와 비교할 때 blunt-ended DNA에 작용하는 힘이 약하므로 일반적인 유전자 재조합 과정에서는 T4 DNA ligase를 더 많이 사용하는 경향이 있다.
● Transformation의 개념
Transformation은 유전자가 삽입된 vector(recombinant DNA)를 bacteria 세포 내로 주입하는 과정이다. 즉, 세포 내로 DNA를 주입하는 것을 말한다.
● Transformation의 종류
heat shock, electroporation, infection, inpofection, transfection
(이번 실험에서는 Prokaryote에 heat shock(chemical method)을 이용한 transformation)
● Competent cell이란 ?
정상적인 bacteria 에 화학처리를 하여 DNA가 잘 들어갈 수 있게 만든 cell을 의미함.
Bacteria을 competent하게 만들기 위해 처리하는 시약은 다음과 같다. 이들 중 가장 중요한
시약은 CaCl2이다.
․Calcium Chloride ․Manganase Chloride
․Hexamminecobalt Chloride ․Dimethyl Sulfoxide (DMSO)

참고 자료

 Ulrich Ketting; Andre Koltermann; Retra Schwille; Manfred (1997) Real-time enzyme kinetics monitored by dual-color fluorescence cross-correlation spectroscopy : vol 95 pp 1416-1420 BIOCHEMISTRY